胰蛋白酶（胰酶）有哪几种？应用指南与选择

胰蛋白酶，是蛋白酶的一种，EC 3.4.4.4，是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中，作为消化酶而起作用。在胰脏是胰蛋白酶的前体胰蛋白酶原被合成后，作为胰液的成分而分泌，受肠激酶，或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。

1.牛胰蛋白酶原有229个氨基酸组成，含6对二硫键，其氨基酸排列顺序和晶体结构已被阐明。在肠激酶活自身催化下，酶原的N末端赖氨酸与异亮氨酸残基之间的肽键被水解，释放出来缬-天-天-天-天-赖6肽，生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个，分子量23800，活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。

2.猪胰蛋白酶的化学结构与牛胰蛋白酶十分相似，在氨基酸残基排列顺序中，只有41个氨基酸残基不同，但分子构型有很大区别。热稳定性较牛胰蛋白酶稳定，Ca2+对酶的保护作用不及牛羊的明显，无螯合Ca2+的中心部位。有6对二硫键，断裂1~2个键，均不至于破坏酶分子的完整结构而保护了酶的活性。酶的活力分别相当于牛的72%及羊的61%。

根据其化学性质和作用机制，胰蛋白酶可以分为多种类型，

主要包括：

(1)动物性胰蛋白酶：来源于猪、牛等动物的胰腺,具有较好的消化效果，但可能携带病原体；

(2)植物性胰蛋白酶：来源于大豆、小麦等植物的胚芽细胞，无传染性，但消化效果相对较差；

(3)微生物源胰蛋白酶:来源于细菌、真菌等微生物，具有较好的消化效率、热稳定性及成本优势；

(4)重组胰蛋白酶：由重组生产，由大肠杆菌、毕赤酵母（Pichia），表达等，氨基酸序列与动物胰腺来源的胰蛋白酶完全一致，且具有与动物源性胰蛋白酶相同的酶学性质，可替代动物来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中。

1.在单细胞组织解离方面，胰蛋白酶也展现出了其独特的优势。通过精确控制胰蛋白酶的浓度和作用时间，可以有效地将组织样本中的细胞分散成单个细胞悬液，为后续的单细胞分析提供高质量的细胞样本。这一过程中，胰蛋白酶的特异性酶解作用起到了关键作用。

2.在蛋白质分析领域，胰蛋白酶也是不可或缺的工具之一。利用胰蛋白酶对蛋白质进行酶解处理，可以获得一系列具有特定序列和长度的肽段。这些肽段可以通过质谱分析等技术进行进一步的鉴定和定量分析，从而揭示蛋白质的氨基酸排列和修饰状态等关键信息。

3.在食品工业中，胰蛋白酶主要用于加工肉类、鱼类、家禽等动物性食品,以及大豆制品、海藻制品等植物性食品。

胰蛋白酶大致可以分为两种，一种是传统使用的动物源性的胰蛋白酶，主要提取自牛或猪的胰腺组织，其缺点是可能会带来病毒污染的风险；另一种则是非动物源性胰酶，即利用基因重组技术生产的重组胰蛋白酶。

项目	动物提取胰蛋白酶	重组胰蛋白酶（药典级）
原料来源	猪 / 牛 / 羊胰腺组织	大肠杆菌 / 毕赤酵母/部分CHO重组表达，全程无动物组分
杂酶	含糜蛋白酶、羧肽酶等；必须 TPCK 处理	无糜蛋白酶、杂蛋白酶污染
外源风险	BSE/TSE、猪细小病毒、口蹄疫等 adventitious agent 风险，必须病毒清除验证	无动物病毒风险，不用动物病毒检测
批间稳定性	波动大（原料批次、动物个体差异）	批次一致性高，酶活、纯度稳定
比活力	药典标准≥2500 U/mg	≥3800 U/mg 蛋白，部分可达 4500+ U/mg
主要杂质	动物源宿主蛋白、DNA、胰腺杂酶	宿主菌蛋白、宿主 DNA、胰蛋白酶原、聚合体、自切片段

西宝生物科提供多种类型来源的胰蛋白酶产品

 普通科研级：实验室细胞传代、蛋白酶切;

 药典级：疫苗、细胞治疗、胰岛素 / GLP?1 工业化生产；

 质谱测序级：多为甲基化修饰重组胰蛋白酶，抑制自水解，减少自切碎片，蛋白组肽图；

产品货号	产品名称	产品来源	产品优点
DCE0060A	胰蛋白酶Trypsin 1:250（猪胰）	来源猪胰腺	经典配方价格友好适用性广
DCE0060N	胰蛋白酶Trypsin（猪胰），1：2500	来源猪胰腺	经典配方价格友好适用性广
DCE0060E	胰蛋白酶Trypsin（牛胰），TPCK处理	来源牛胰腺	预处理以抑制残留的糜蛋白酶活性
			具更高的胰蛋白酶活性
DCE0060L	胰蛋白酶Trypsin （牛胰），1:250	来源牛胰腺	广泛用于细胞传代
DCE0060PA	胰蛋白酶Trypsin（牛胰），1:2500	来源牛胰腺	经典配方价格友好适用性广
ACE0698B	重组胰蛋白酶消化液，含EDTA	大肠杆菌	无动物来源，温和解离，保持细胞活性室温稳定，使用更方便
DCE0060R	重组胰蛋白酶消化液（不含酚红），0.025mg/ml	微生物发酵	无动物源成分；
			无其他蛋白酶（如糜蛋白酶）污染；
			不含蛋白酶抑制剂（如PMSF等）；
			比活性高，细胞消化效率高。
DCE0060S	重组胰蛋白酶消化液 LS，0.025mg/ml	毕赤酵母	无动物来源
			更适合敏感细胞消化
DCE0060X	重组胰蛋白酶（r-Trypsin），冻干	毕赤酵母	无动物来源
			高纯度和高酶活性
			无其他杂酶残
DCE0060Z	胰蛋白酶（r-Trypsin）质谱级，冻干	来源猪胰腺	质谱测序用
			活性高
			酶切漏切率小
ECE0060AA	重组胰蛋白酶（r-Trypsin）（药典级）	大肠杆菌	无动物来源
			高纯度
			高活性