抗体药糖基化分析常见的工具酶

据统计：2025 年全球全部抗体类药物（单抗、ADC、双特异性抗体）整体市场规模约3040 亿美元，同比 2024 年上涨 13%；其中 ADC 整体规模 165.1 亿美元，双抗整体规模 178 亿美元；肿瘤抗体占总市场 56%，自身免疫抗体占 28%。

表：2025 年全球销售额 TOP-10 抗体药物明细表

排名	通用名（商品名）	药企	作用靶点	适应症	2025 年销售额（亿美金）	药物类型
1	帕博利珠单抗（Keytruda）	默沙东	PD-1	多实体瘤免疫治疗	316.80	全人源单抗
2	度普利尤单抗（Dupixent ）	赛诺菲	IL-4Rα	特应性皮炎、哮喘、鼻窦炎	141.40	全人源单抗
3	利生奇珠单抗（Skyrizi）	艾伯维	IL-23	银屑病、银屑病关节炎	117.20	全人源单抗
4	达雷妥尤单抗（Darzalex ）	强生	CD38	多发性骨髓瘤	116.70	全人源单抗
5	乌司奴单抗（Stelara）	强生	IL-12/IL-23	银屑病、克罗恩病	104.20	全人源单抗
6	纳武利尤单抗（Opdivo）	百时美施贵宝	PD-1	多实体瘤	88.30	全人源单抗
7	奥法木单抗（Kesimpta）	诺华	CD20	多发性硬化症	84.30	全人源单抗
8	曲妥珠单抗（Herceptin）	罗氏	HER2	HER2 阳性乳腺癌、胃癌	73.60	人源化单抗
9	贝伐珠单抗（Avastin ）	罗氏	VEGF	结直肠癌、肺癌、胶质母细胞瘤	70.10	人源化单抗
10	艾美赛珠单抗（Hemlibra）	罗氏	FIX/FX	A 型血友病	61.50	双特异性抗体

在单克隆抗体、融合蛋白等治疗性抗体药物的研发与质控体系中，糖基化是核心的翻译后修饰工艺指标，直接决定药物的药效活性、安全性与稳定性。抗体Fc段的N-糖基化修饰可调控抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用、补体依赖的细胞毒性作用及药物半衰期，异常糖基化会引发药效下降、免疫原性升高、副作用加剧等问题。因此，精准解析抗体糖型结构、定量分析糖基化修饰比例，是抗体药工艺优化、质量检定、合规上市的关键环节。

酶解法是目前抗体糖基化分析的主流技术，凭借特异性强、反应温和、不破坏蛋白结构的优势，成为实验室与工业生产的核心手段，各类专用工具酶则是实现精准糖基化分析的核心载体。抗体糖基化分析工具酶主要分为糖苷内切酶与糖苷外切酶两大类别，两类酶各司其职、相互配合，可完成从糖链整体释放、骨架切割到末端糖残基解析的全流程分析。

图：图片由AI生成

一、糖苷内切酶的作用（糖链骨架切割）

糖苷内切酶核心功能为特异性切割糖链核心骨架，完整保留糖链整体结构，主要用于抗体糖型的整体定性、定量分析，是糖基化常规检测、样本前处理的核心酶种，细分核心品类如下：

1、PNGase F：该酶可靶向作用于糖链与天冬酰胺连接的壳二糖核心位点，几乎无底物偏好性，能够完整切割并释放哺乳动物抗体蛋白中所有复杂型、杂合型、高甘露糖型N-糖链。

2、Endo系列内切酶：首先，Endo H专一性切割高甘露糖型与杂合型N-糖链，对成熟复杂型糖链无作用，可精准甄别抗体发酵过程中未成熟的糖基化中间体，广泛用于生产工艺的糖基化成熟度动态监测；其次，EndoS、EndoS2为IgG抗体专属酶，仅特异性识别切割人IgG Fc区N-糖链，对游离糖链、杂蛋白糖链无活性，可彻底规避样本杂质干扰，适配抗体Fc糖基化定点分析与精准修饰研究。

3、O-糖苷酶：主要是填补抗体O-糖基化检测空白，是全维度糖基化分析的关键配套酶。该酶可特异性切割丝氨酸、苏氨酸连接的无末端修饰黏蛋白型O-糖链，完整释放O-糖链结构。

二、糖苷外切酶的作用（糖链末端结构解析）

糖苷外切酶与内切酶形成功能互补，可从糖链末端逐个水解单糖残基，通过分步酶解差异比对，精准识别糖链末端各类修饰结构，解决细微糖型差异鉴别难题，核心酶分类如下：

1、唾液酸酶：是直接关联抗体药效与安全性的核心外切酶，专一性水解糖链末端的唾液酸残基。唾液酸化修饰是调控抗体体内半衰期、免疫原性的关键指标，唾液酸酶可通过可控分步酶解，精准定量高、中、低不同唾液酸化水平的糖型占比，快速区分样本间糖基化细微差异，为抗体药工艺参数优化、药效稳定性控制提供数据支撑。

2、β-半乳糖苷酶：其核心功能为水解糖链末端的半乳糖残基，是判定抗体糖链成熟度的关键酶种。该酶可特异性识别并切除末端半乳糖，通过酶解前后图谱对比，清晰区分完全半乳糖化正常糖型与半乳糖缺失缺陷糖型，精准捕捉生产工艺波动引发的糖基化异常。

3、β-N-乙酰氨基己糖苷酶：该酶常与β-半乳糖苷酶协同使用，可进一步拆解N-糖链的核心分支结构，精准判定糖链分支数量、分支类型，完整解析复杂型N-糖链的完整骨架结构，弥补单一酶解的检测盲区，全面还原抗体糖链的精细结构特征。

4、岩藻糖苷酶：岩藻糖化修饰会显著抑制抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用，直接降低抗体药物抗肿瘤活性。岩藻糖苷酶可精准切割岩藻糖残基，通过酶解定量分析，准确检测样本中低岩藻糖抗体占比，为高活性去岩藻糖抗体的工艺开发、质量定量提供核心支撑。

不同特异性工具酶的精准应用，彻底解决了传统糖基化分析特异性弱、分辨率低、覆盖不全的行业痛点，有效保障了治疗性抗体药物批次间的质量一致性与药效稳定性，为抗体工艺迭代优化、质量标准建立、新药注册申报提供核心技术支撑。随着高端抗体、新型融合蛋白药物的快速发展，高活性、高特异性的工具酶将成为糖基化精准质控的核心耗材，持续推动抗体药物质量体系向精细化、标准化、合规化升级。

产品名称	产品货号	包装规格
重组PNGaseF（肽-N-糖苷酶F）	ECE0441H	20KU
重组EndoH（糖苷内切酶H）	DCE0447C	3KU/15KU
重组EndoS（糖苷内切酶S）	DCE1244D	20ug
O糖蛋白酶	DCE0448B	20U/100U
O-糖苷酶	DCE0448C	2000KU/10000KU
唾液酸酶(α2-3,6,8)	DCE0457F	500U/2KU/10KU
唾液酸酶(α2-3,6,8,9）	DCE0457E	2KU/10KU

产品名称	产品货号	包装规格
Seebio® 分选酶A（Sortase A）	ECE0720A	100μg/1mg/10mg
Seebio® 分选酶A（Strep tag II）	ECE0724A	100μg/500μg/1mg
Seebio® 重组烟草蚀纹病毒蛋白酶（TEV酶）	EBY3644B	5mg/10mg
Seebio®TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性测定试剂盒(荧光法)	EKM0101B	50T
SUMO 蛋白酶(冻干粉)	EAE0087A	1mg
重组肠激酶	ECE1123A	100U
大肠杆菌表达重组肠激酶（不带标签）	DAA1065A	100U
重组HRV 3C蛋白酶	FCE1220A	1KU
凝血酶	ECE0616D	1KU
重组双碱性内切酶（RKex2）	EXA0277B	1mg/10mg/100mg