双链特异性直接消化cDNA削减试剂盒 DsDD cDNA Subtraction Kit

无需断片即可削减Tester cDNA。

DsDD（Duplex-specific Direct Digestion）cDNA Subtraction Kit Wako是从cDNA库通过削减法配制Tester和Driver cDNA。利用Tester和cDNA混合形成组织非特异性表达的基因，再通过双链特异性DNA核酸酶-Duplex-specific nuclease分解杂交cDNA。分解后，用ExonucleaseⅠ分解去除残留Driver cDNA，从而实现在Tester cDNA中高效浓缩特异性表达的cDNA。

本品用作解析癌细胞组织特异性功能和性质时，Tester cDNA从癌细胞组织、而Driver cDNA从正常细胞中提取，可浓缩来自癌细胞组织特异性表达的基因的cDNA 。DsDD cDNA Subtraction Kit 中的cDNA库 可作为起始材料，全部工序完成仅需2天，是划时代的技术。

●　可从cDNA库制作

●　Tester和Driver的优异选择性

●　采用Duplex-specific nuclease去除法

●　操作简单，作业工序仅需2天

准备Tester cDNA库和Driver cDNA库。在Tester cDNA库中，cDNA插入方向要与载体一致。 １．扩增Tester cDNA 扩增DNA中在5’端添加磷酸引物使用。 ２． λ 核酸外切酶处理 识别双链DNA 5’端磷酸化引物并从5’到3’开始降解。Tester没有杂交，削减效率加强。 ３．限制性内切酶处理 消化两端的接头保证准确的杂交结果。 ４．杂交 Tester cDNA和Driver cDNA在68℃中反应16-20小时（混合比率=1:200）。过量的Driver cDNA使大部分Tester cDNA形成单链DNA。 ５．双链特异性核酸酶处理 酶特异性酶切单链DNA。高反应温度（68℃）保证反应的特异性。 ６．核酸外切酶 I处理 酶特异性酶切单链DNA。非特异性基因为单链，然后被降解。反应后，Tester能特异性表达基因的单链DNA能保留。 此高效cDNA削减方法完成仅需2天。

利用人肝癌来源的HepG2细胞和人正常肝脏来源的cDNA库，对高表达管家基因-GAPDH和HepG2细胞中特异性表达的AFP基因进行削减。

在HepG2 cDNA和正常肝脏cDNA都能检测出GAPDH的条带，但Subtraction cDNA没有检测出条带。另外，正常肝脏组织cDNA没有检测出AFP条带，但在Subtraction cDNA中能检测到与HepF2 cDNA同等亮度的AFP条带。通过本方法得到的Subtraction cDNA能高效浓缩HepG2的特异性表达基因。

产品编号	产品名称	产品规格
294-62001	DsDD cDNA Subtraction Kit Wako	5次用