AAV载体全攻略：从细胞感染到动物模型的高效应用指南

作为一种基因递送工具，腺相关病毒（AAV）在基因治疗和基础研究中发挥着重要作用。AAV具备宿主范围广泛、安全性高、免疫原性低、表达稳定和物理性质稳定等优势，已广泛应用于多种细胞及动物模型。

提供一系列高品质的AAV产品。产品涵盖多种血清型与报告基因，可满足您在体外细胞感染和体内动物实验中的多样化科研需求。

1. 成熟的无血清悬浮培养体系

可规模化放大的无血清悬浮培养技术，确保病毒产量高、批次间一致性强

2. 多种血清型纯化平台

覆盖常见AAV血清型（如AAV1, 2, 5, 6, 8, 9）

3. 免疫原性低

当AAV用局部大剂量感染肌肉、脑、眼等组织时,不易造成免疫反应

4. 宿主范围广

AAV可以感染分裂细胞和非分裂细胞

5. 表达稳定

AAV滴度可至5E+13GC/mL,并可在体内长期稳定表达

AAV病毒体积=最佳MOI×细胞数目/病毒滴度

例如，如果目的细胞的最佳MOI=10000，需要感染10^⁵的细胞，共计需要10^⁹ GC的病毒.如果病毒滴度为1×10^¹² GC/mL,那么就需要将1ul的病毒加入培养基中。

易感细胞MOI建议：1000-50000

难感细胞MOI 建议：2000000

强烈建议：使用含GFP或Luciferase的AAV进行预实验，确定最佳MOI。

转导前1天

将靶细胞接种到培养皿中，调整细胞量使转导时融合度为30%-50%。

37°C、5% CO₂培养箱中培养18-20小时。

第1天

轻柔混匀病毒液，与适量培养基混合（建议培养基用量约100 μl/cm²，如6孔板每孔用1 ml）。

移除细胞原有培养基，加入含病毒培养基。

轻摇培养板使分布均匀，37°C、5% CO₂培养过夜（或缩短至6-8小时以减少细胞毒性）。

第2天

移除含病毒培养基，更换为新鲜完全培养基。

继续培养过夜。

第3天及之后

通常在转导后24-48小时，目的基因表达明显，可进行后续分析。

使用表达绿色荧光蛋白的AAV2型腺相关病毒以MOI=10000转导293T细胞。100×参数下拍照。左图：明视野；右图：绿色荧光。

AAV/IE1在HEK293细胞中呈阳性表达。A：原始放大倍数 20×；B：原始放大倍数 63×。

体内动物注射（以小鼠为例）

推荐起始剂量（按体重）：

为了确定用于小鼠或其他小动物注射的AAV最佳量，建议首次测试三种剂量：10^¹¹、10^¹²和10^¹³ GC/kg。

注射5种血清型（1/2/6/8/9）的AAV-eGFP载体至小鼠体内转染心脏

假设您的小鼠是20克，三种剂量是2x10^⁹、2x10^¹⁰和2x10^¹¹ GC/小鼠。如果正在进行非局部注射，您可能还需加入更高的剂量，如4x10^¹¹ GC/小鼠。请注意，这些是针对小鼠的通用指南，可能不适用于大型动物模型（如猪、非人灵长类动物）。

检测项目	检测方法
鉴别	PCR + Sanger测序（目的基因序列验证）
含量	qPCR（基因组滴度）
纯度	SDS-PAGE（衣壳蛋白鉴别）
空壳率	AUC 检测
安全性	凝胶限度法（内毒素检测）

产品名称	货号	产品描述
AAV1-pAV-CMV-luciferase	FBX9501	报告基因 AAV
AAV2-pAV-CMV-Luciferase	FBX9502	报告基因 AAV
AAV5-pAV-CMV-Luciferase	FBX9503	报告基因 AAV
AAV6-pAV-CMV-Luciferase	FBX9504	报告基因 AAV
AAV8-pAV-CMV-Luciferase	FBX9505	报告基因 AAV
AAV9-pAV-CMV-Luciferase	FBX9506	报告基因 AAV

产品名称	货号	产品描述
MyoAAV 1A-pAV-CMV-GFP	FBX9507	报告基因 AAV
AAV2-pAV-CMV-GFP	FBX9508	报告基因 AAV
AAV8-pAV-CMV-GFP	FBX9509	报告基因 AAV
AAV9-pAV-CMV-GFP	FBX9510	报告基因 AAV

产品名称	货号	产品描述
AAV2 空壳病毒	FBX9511	空壳 AAV
AAV5 空壳病毒	FBX9512	空壳 AAV
AAV6 空壳病毒	FBX9513	空壳 AAV
AAV8 空壳病毒	FBX9514	空壳 AAV
AAV9 空壳病毒	FBX9515	空壳 AAV

运输：全程干冰冷链

长期保存：–80°C（稳定性 ≥1年）

短期保存：–20°C（≤2–3周）或 4°C（融解后，1–2周）

使用前：4°C缓慢融化

分装建议：按单次用量分装，避免反复冻融（虽AAV较稳定，但仍建议最大限度保护活性）

1. Yu Y, et al.Protective CD8+ T-cell responses to cytomegalovirus driven by rAAV/GFP/IE1 loading of dendritic cells. Chiriva-Internati M -Journal of translational medicine(2008)

2. Prasad KM,et al.Robust cardiomyocyte-specific gene expression following systemic injection of AAV: in vivo gene delivery follows a Poisson distribution. French BA -Gene therapy(2010)