辣根过氧化物酶标记二抗在免疫诊断试剂中的应用优势与评估

酶标抗体和蛋白是现代免疫诊断试剂的核心信号放大元件。其中，辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗鼠、羊抗兔，因其高灵敏度、强特异性，在疾病诊断、食品安全、科研等领域应用广泛。本文将从应用场景、标记工艺及性能评价，对HRP标记羊抗鼠、HRP标记羊抗兔进行梳理。

应用场景：该产品是检测小鼠来源一抗（如单克隆抗体）的通用二抗。其主要应用于酶联免疫吸附试验（ELISA）、蛋白质印迹（Western Blot）以及免疫组化（IHC）等平台，特别在食品安全检测（如兽药残留分析）和基础科研中扮演关键角色。它能特异性识别小鼠IgG的重链和轻链，且与人类IgG无交叉反应，保证了检测的特异性。

标记工艺：主流工艺是过石典酸钠氧化法（如图1所示）。这种方法的基本原理是将HRP的糖基用过石典酸钠氧化成醛基，然后这个醛基与抗体的氨基（-NH2）反应，形成希夫氏碱（Schiff base）。为了防止HRP中糖的醛基与其自身蛋白的氨基发生偶合，通常会在用过石典酸钠氧化前先用二硝基氟-苯阻断氨基。氧化反应结束后，再用氰基石朋氢化金内或石朋氢化金内来稳定希夫氏碱‌。

图1 HRP标记抗体原理图

应用场景：作为检测兔源一抗的二抗，广泛应用于Western Blot、ELISA和免疫组化检测。在临床诊断试剂盒（如自身抗体检测、传染病检测）及病理学研究中被大量使用。其高灵敏度、低背景的特性，使得对微弱信号的检测成为可能。

标记工艺：其标记原理与HRP标记羊抗鼠相同，主要采用过石典酸钠法。通过对高纯度山羊抗兔IgG进行亲和纯化，再与HRP进行共价偶联，确保产物具有高特异性和稳定的酶活性。

序号	物料名称	货号
1	Seebio® 辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG (H+L)，HRP-Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	DCY0036C
2	Seebio® 辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG (H+L)   HRP-Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	DCY0075C

1）将纯化好的人IgG按照一定浓度包被96孔板备用。

2）将西宝生物与进口品牌Jackson的HRP标记羊抗鼠IgG二抗采用合适稀释液稀释成相同的工作浓度。

3）将鼠-IgG使用1xPBS按照如下浓度50ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL、1.56ng/mL、0.78ng/mL、0ng/mL配制完成。

4）配制好的梯度样品按照每孔50ul加入包被板中，再加入酶工作液按照每孔50ul加入包被的发光板中，37℃反应20min后洗板。

5）将反应好的板去除上清液，并用清洗液进行洗涤，每块板洗涤三次。

6）在洗涤完成的板中加入100ul发光底物，37℃孵育5min，加入100ul终止液，在酶标仪上测OD值，并导出、处理、汇总数据。

序号	鼠IgG浓度 ng/mL	JACKSON HRP-羊抗鼠IgG	西宝HRP-羊抗鼠IgG批次1	西宝HRP-羊抗鼠IgG批次2	西宝批次1与JACKSON偏差1	西宝批次2与西宝批次1偏差
		OD值
S0	0	0.292	0.323	0.294	0.292	0.323
S1	0.78	0.396	0.363	0.378	0.396	0.363
S2	1.56	0.463	0.456	0.440	0.463	0.456
S3	3.125	0.738	0.678	0.668	0.738	0.678
S4	6.25	0.892	0.841	0.856	0.892	0.841
S5	12.5	1.347	1.264	1.322	1.347	1.264
S6	25	2.433	2.259	2.132	2.433	2.259
S7	50	3.248	3.096	2.999	3.248	3.096
平均偏差（不含S0）					-6.0%	-0.4%

1）采用西宝HRP-羊抗鼠IgG批次1与进口品牌Jackson HRP-羊抗鼠IgG做性能对比，结果平均偏差6%，说明西宝HRP-羊抗鼠IgG与进口品牌Jackson HRP-羊抗鼠IgG性能相当，可进行国产替代；

2）采用西宝HRP-羊抗鼠IgG批次2与西宝HRP-羊抗鼠IgG批次1做性能对比，结果平均偏差0.4%，说明西宝HRP-羊抗鼠IgG批间差异小。

1）浓缩液37℃热加速试验

序号	鼠IgG浓度 ng/mL	西宝HRP-羊抗鼠IgG批次1
		37℃热加速7天 偏差	37℃热加速10天 偏差	37℃热加速15天 偏差
S0	0	6.3%	-7.9%	5.6%
S3	3.125	0.5%	-5.7%	7.3%
S5	12.5	3.9%	-1.1%	3.0%
S7	50	1.8%	-1.5%	2.2%
平均偏差（不含S0）		2.1%	-2.8%	4.1%

分析：将西宝HRP-羊抗鼠IgG批次1浓缩液分别做37℃热加速实验，结果表明热加速7天、10天、15天平均变化分别为2.1%、-2.8%及4.1%，表明西宝HRP-羊抗鼠IgG浓缩液热稳定性良好。

2）工作液37℃热加速试验

序号	鼠IgG浓度 ng/mL	西宝HRP-羊抗鼠IgG批次1（Seebio® HRP标记抗体稀释液1）
		37℃热加速7天偏差	37℃热加速15天偏差
S0	0	-8.2%	6.6%
S3	3.125	0.7%	-1.9%
S5	12.5	-4.0%	2.3%
S7	50	-5.9%	-3.3%
平均偏差（不含S0）		-3.1%	-1.0%
序号	鼠IgG浓度 ng/mL	西宝HRP-羊抗鼠IgG批次1（Seebio® HRP标记抗体稀释液2）
		37℃热加速7天偏差	37℃热加速15天偏差
S0	0	-4.3%	6.1%
S3	3.125	-5.4%	9.8%
S5	12.5	-5.3%	-5.7%
S7	50	-1.7%	-8.2%
平均偏差（不含S0）		-4.1%	-1.4%

1）将西宝HRP-羊抗鼠IgG批次1采用Seebio® HRP标记抗体稀释液1（货号：DCC0268B）稀释成工作液分别做37℃热加速实验，结果表明热加速7天、15天平均变化分别为-3.1%及-1.0%，表明在Seebio® HRP标记抗体稀释液1（货号：DCC0268B）下西宝HRP-羊抗鼠IgG配制成工作液热稳定性良好；

2）将西宝HRP-羊抗鼠IgG批次1采用Seebio® HRP标记抗体稀释液2（货号：DCC0268C）稀释成工作液分别做37℃热加速实验，结果表明热加速7天、15天平均变化分别为-4.1%及-1.4%，表明在Seebio® HRP标记抗体稀释液2（货号：DCC0268C）下西宝HRP-羊抗鼠IgG配制成工作液热稳定性良好。

1）将纯化好的鼠IgG按照一定浓度包被96孔板备用。

2）将西宝生物与进口Jackson的HRP标记羊抗兔IgG采用合适稀释液稀释成相同的工作浓度。

3）将兔抗鼠-IgG使用1xPBS按照如下浓度50ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL、1.56ng/mL、0.78ng/mL、0ng/mL配制完成。

4）配制好的梯度样品按照每孔50ul加入包被的发光板中，再酶工作液按照每孔50ul加入包被的发光板中，37℃反应20min后洗板。

5）将反应好的板去除上清液，并用清洗液进行洗涤，每块板洗涤三次。

6）在洗涤完成的板中加入100ul发光底物，37℃孵育5min，加入100ul终止液，在酶标仪上测OD值，并导出、处理、汇总数据。

序号	兔抗鼠- IgG浓度 ng/mL	JACKSON HRP-羊抗兔IgG	西宝HRP-羊抗兔IgG批次1	西宝HRP-羊抗兔IgG批次2	西宝批次1与JACKSON偏差1	西宝批次2与西宝批次1偏差
		OD值
S0	0	0.255	0.273	0.290	6.9%	6.3%
S3	3.125	0.465	0.502	0.482	8.0%	-3.9%
S5	12.5	1.462	1.595	1.535	9.1%	-3.8%
S7	50	3.025	2.829	2.989	-6.5%	5.7%
平均偏差（不含S0）					3.5%	-0.7%

1）采用西宝HRP-羊抗兔IgG批次1与进口品牌Jackson的 HRP-羊抗兔IgG做性能对比，结果平均偏差为3.5%，说明西宝HRP-羊抗兔IgG与进口品牌Jackson的HRP-羊抗兔IgG性能相当，可进行国产替代；

2）采用西宝HRP-羊抗兔IgG批次2与西宝HRP-羊抗兔IgG批次1做性能对比，结果平均偏低0.7%，说明西宝HRP-羊抗兔IgG批间差异小。

1）浓缩液37℃热加速试验

序号	兔抗鼠IgG浓度 ng/mL	西宝HRP-羊抗兔IgG批次1
		37℃热加速7天偏差	37℃热加速10天偏差	37℃热加速15天偏差
S0	0	9.0%	-2.6%	6.6%
S3	3.125	9.3%	-4.2%	-6.0%
S5	12.5	4.6%	-1.4%	-3.0%
S7	50	3.7%	-0.8%	-2.2%
平均偏差（不含S0）		5.9%	-2.2%	-3.7%

分析：将西宝HRP-羊抗兔IgG批次1浓缩液分别做37℃热加速实验，结果表明热加速7天、10天、15天平均变化分别为5.9%、-2.2%及-3.7%，表明西宝HRP-羊抗兔IgG浓缩液热稳定性良好。

2）工作液37℃热加速试验

序号	兔抗鼠-IgG浓度ng/mL	西宝HRP-羊抗兔IgG批次1（Seebio® HRP标记抗体稀释液1）
		37℃热加速7天偏差	37℃热加速15天偏差
S0	0	0.8%	3.5%
S3	3.125	-9.9%	1.8%
S5	12.5	-3.0%	-3.7%
S7	50	-1.4%	-8.0%
平均偏差（不含S0）		-4.7%	-3.3%
序号	兔抗鼠IgG浓度ng/mL	西宝HRP-羊抗兔IgG批次1（Seebio® HRP标记抗体稀释液2）
		37℃热加速7天偏差	37℃热加速15天偏差
S0	0	2.2%	1.5%
S3	3.125	2.0%	-4.7%
S5	12.5	-3.6%	-7.1%
S7	50	-3.7%	-3.7%
平均偏差（不含S0）		-1.7%	-5.1%

1）将西宝HRP-羊抗兔IgG批次1采用Seebio® HRP标记抗体稀释液1（货号：DCC0268B）稀释成工作液分别做37℃热加速实验，结果表明热加速7天、15天平均变化分别为-4.7%及-3.3%，表明在Seebio® HRP标记抗体稀释液1（货号：DCC0268B）下西宝HRP-羊抗兔IgG配制成工作液热稳定性良好；

2）将西宝HRP-羊抗兔IgG批次1采用Seebio® HRP标记抗体稀释液2稀释成工作液分别做37℃热加速实验，结果表明热加速7天、15天平均变化分别为-1.7%及-5.1%，表明在Seebio® HRP标记抗体稀释液2下西宝HRP-羊抗兔IgG配制成工作液热稳定性良好。

产品名称	货号	备注
Seebio® 辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG (H+L)   HRP-Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	DCY0075C	1mg、5mg
Seebio® 辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG (H+L) HRP-Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	DCY0036C	1mg、5mg
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羊抗鼠IgG	DCY4483E	25mg、100mg
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小鼠IgG（冻干粉）	EKN0346B	25mg、100mg
鼠抗人IgG单克隆抗体	EKN0255B	1mg、5mg
Seebio® 辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG (H+L)   HRP-Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)	DCY0075C	1mg、5mg
Seebio® 辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG (H+L)， HRP-Goat Anti-Mouse IgG (H+L)	DCY0036C	1mg、5mg
辣根过氧化物酶标记亲和纯化山羊抗兔IgG（H+L）	111-035-144	1.5ml/支
辣根过氧化物酶HRP标记亲和纯化山羊抗小鼠IgG (H+L)	115-035-003	2.0ml/支
Seebio® HRP标记抗体稀释液	DCC0268B	100ml、500ml
Seebio® HRP标记抗体稀释液	DCC0268C	100ml、500ml
鲁米诺（3-氨基-苯二甲酰肼）	DCD0017B	10g
异鲁米诺（4-氨基邻苯二甲酰肼）	DCD0018A	1g