DNA & siRNA 转染试剂 ScreenFect(TM) A plus

ScreenFect ™A plus（也称作ScreenFect ™A+）是通过点击化学（Click Chemistry）筛选^※1出的新型阳离子脂质体组成的转染试剂，适用于各种真核生物来源的细胞，也可直接添加至含有抗生素或者血清的培养基中。

使用 ScreenFect ™A plus转染试剂可将DNA和siRNA导入通用实验细胞系（HeLa、HepG2、MDCK等）、干细胞（小鼠ES细胞等）、血细胞（巨噬细胞、THP-1、RAW264.7等）、小胶质细胞、原代细胞（原代培养）和昆虫细胞中。其细胞毒性低，因此转染后无需更换培养基。另外，试剂成分中不含有任何有毒有害物质。

※1 Biomaterials. 2012 Nov; 33(32):8160-6. 2012

● DNA和ScreenFect ™A plus试剂混合比例可选范围更广

● 使用一步法缩短分析时间至1天

● 可高效转染难以导入的细胞

● 成本低

※ MCF-7：人乳腺癌来源细胞（上皮细胞样形态）（贴壁系）

※ 导入方法：A公司新产品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法

※ MDCK：狗肾小管上皮细胞来源（贴壁系）

※ 导入方法：A公司新产品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法

※ K562：人慢性髓性细胞白血病细胞来源（悬浮系）

※ 导入方法：A公司新产品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法

进行向LNCaP细胞（贴壁系）中导入YFP融合基因的实验，在荧光显微镜下比较导入基因的表达效率。

使用ScreenFect ™A plus和增强剂SFA P-reagent，可以观察到与其他公司产品相同或更高的表达效率。

※ 数据刊登于BioWindow Num.144 (2016年6月号)

〔接种细胞数〕3×105 cells/well 〔质粒DNA量〕1 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 　pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 3 〔孔板〕24孔板	〔接种细胞数〕1.5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕1 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 　pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 3 〔孔板〕24孔板

进行向HeLa细胞（贴壁系）中导入EGFP_mRNA的实验，在荧光显微镜下比较EGFP的表达效率。

使用ScreenFect ™A plus和增强剂SFA P试剂（产品编号：191-18331、197-18333），可以观察到与其他公司产品相同或更高的表达效率。

※ 数据刊登于BioWindow Num.144 (2016年6月号)

〔接种细胞数〕0.7 x 10⁵ cells/well

〔mRNA量〕0.1 µg/assay

〔转染试剂混合比例〕mRNA量 (µg) : ScreenFect ™ A plus 试剂(µL) = 1 : 4

〔检测时间〕转染后48 h

〔曝光时间〕2 s

进行将hiPSC（201B7株) 通过反向转染（1-STEP)导入GFP融合基因的实验，在荧光显微镜以及流式细胞仪下比较导入基因的表达效率。

使用反向转染法转染hiPS细胞的效果优异，在StemSure^® hPSC培养基Δ和mTeSR™ 1两个培养基中，ScreenFect ™A plus表现出与其他公司产品相同或更高的导入效率。

※ 数据刊登于BioWindow Num.144 (2016年6月号)

1-step 使用StemSure® hPSC培养基Δ
ScreenFect™A plus的转染条件 〔细胞数〕5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕4 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 　pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 0.5 〔孔板〕12孔板 〔备注〕SFA plus reagent以及pDNA使用了Opti-MEM® 进行稀释。	其他公司产品的转染条件 〔细胞数〕5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕2 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 　pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 2 〔孔板〕12孔板

1-step 使用mTeSR™1培养基
ScreenFect™A plus和其他公司产品的转染条件 〔细胞数〕5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕1 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 　pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 2 〔孔板〕12孔板 〔备注〕SFA plus reagent以及pDNA使用了Opti-MEM® 进行稀释。

使用反向转染（1-STEP）法以及正向转染（2-STEP）法进行向HeLa细胞中导入PIK3CB siRNA的实验，通过实时定量PCR测量PIK3CB mRNA的表达水平。

在定量结果的基础上与其他公司产品比较敲降效率，结果显示ScreenFect ™A plus表现出与其他公司产品相同或更高的敲降效率。

※ 数据刊登于BioWindow Num.149 (2017年3月号)

〔接种细胞数〕1×105 cells/well 〔siRNA〕5 pmol/assay 〔转染试剂混合比例〕ScreenFect ™A plus reagent = 0.5～1.5 µL 其他公司产品 = 1.5 μL 〔孔板〕24孔板 〔检测时间〕48 h后进行确认	〔接种细胞数〕0.5×105 cells/well 〔siRNA〕5 pmol/assay 〔转染试剂混合比例〕ScreenFect ™A plus reagent = 0.5～1.5 µL 其他公司产品 = 1.5 μL 〔孔板〕24孔板 〔检测时间〕48 h后进行确认

产品	ScreenFect™A plus	A公司新产品(+reagent)	A公司的新产品
各条件	1-Step	2-Step
实验方案天数	2 Days	3 Days
DNA量	少	多
是否需要调整细胞数	可随时调整	取决于预培养条件
是否需要胰蛋白酶处理	转染时	预培养时
基于HTS细胞检测的可操作性	+++++	+
是否需要更换培养基	取决于细胞

1步法 → 从转染到本分析的时间可缩短24 h！

DNA 转染 (/well)
孔板类型	表面积	培养基体积	SF-DNA 复合物的总体积	DNA /稀释buffer	转染试剂 /稀释buffer
96 wells	0.3 cm2	100 µL	10 µL	50 ng/5 μL	0.15 or 0.2 μL/5 μL
24 wells	2 cm2	500 µL	50 µL	250 ng/25 μL	0.75 or 1.0 μL/25 μL
12 wells	4 cm2	1,000 µL	100 µL	500 ng/50 μL	1.5 or 2.0 μL/50 μL
6 wells	10 cm2	2,000 µL	250 µL	1,250 ng/125 μL	3.75 or 5.0 μL/125 μL

注：进行大规模转染时，请在转染前准备多个微管，之后再进行转染。

例：10 cm培养皿转染相当于 → 5~6个样品（6孔板）

产品随附的说明书中提供了简易的实验方案，请确认“相关资料”中的文件。

ScreenFect™A plus推荐使用1步转染法。在试剂方面，为保证充分的转染效率，推荐质粒DNA与转染试剂的混合比例为1 : 3~1 : 4。另外，如希望进一步抑制转染时的细胞毒性，请使用60~80%汇合度的细胞。

siRNA 转染 (/well)
孔板类型	表面积	培养基体积	SF-siRNA 复合物的总体积	siRNA /稀释buffer	转染试剂 /稀释buffer
96 wells	0.3 cm2	100 µL	10 µL	1 pmol/5 µL	0.1～0.3 µL/5 µL
24 wells	2 cm2	500 µL	50 µL	5 pmol/25 µL	0.5～1.5 µL/25 µL
12 wells	4 cm2	1,000 µL	100 µL	10 pmol/50 µL	1.0～3 µL/50 µL
6 wells	10 cm2	2,000 µL	250 µL	25 pmol/125 µL	2.5～7.5 µL/125 µL

注：虽然ScreenFect ™A plus也可以用于siRNA转染，但更推荐使用ScreenFect ™ siRNA 进行siRNA转染。

更多详细资料请联系富士胶片和光。

No.	细胞名称	No.	细胞名称	No.	细胞名称	No.	细胞名称
1	143BTK	22	GP2-293	43	LLC-MK2	64	OLHNI-2
2	786-O	23	H9C2	44	LO2	65	Mouse overy cell
3	A2058	24	HCT116	45	LoVo	66	PC12
4	A375	25	HEK293	46	MC3T3	67	Plat-E
5	A549	26	HEK293 TN	47	MC3T3-E1	68	PLC8024
6	B16	27	HEK293A	48	MCF-10	69	Primary Fibroblast
7	B16F10	28	HEK293F	49	MCF-10A	70	RAW264.7
8	Ba/F3-CH1	29	HEK293FT	50	MCF-7	71	SH-SY5Y
9	BEAS-2B	30	HEK293T	51	MDCK	72	SK-Hep1
10	BEL-7402	31	HeLa	52	MEF	73	SKOV3
11	BT549	32	HeLa S3	53	mES	74	T98G
12	C2C12	33	HEp-2	54	mHSC	75	TE-13
13	Cell line from killifish 来自鳉鱼的细胞系	34	HepG2	55	Microglia 小胶质细胞	76	THP-1
14	CHO-K1	35	hiPSC	56	MLEC	77	U-251 MG
15	COS-7	36	HK2	57	MS-1	78	U2OS
16	DB lymphoma DB淋巴瘤	37	HKC	58	Myeloid dendritic cell (MDC) 骨髓树突状细胞	79	U937
17	DC 2.4	38	HL7704	59	NB1RGB	80	Vero
18	Du145	39	HuH-7	60	NCI-H1703	81	Drosophira ovary somatic cell
19	EL4	40	HUVEC	61	NE3	82	HT1080
20	Endothelium cell 内皮细胞	41	Ins-1	62	NIH 3T3	83	RH7777
21	EPC(carp)	42	L428	63	NK92	84	HaCaT

富士胶片和光将实时更新ScreenFect™数据库中的使用实例，如对上述内容有疑问，欢迎随时联系进行咨询。

产品编号	产品名称	产品规格
293-73201	ScreenFect™ A	0.2 mL
299-73203	ScreenFect™ A	1 mL
297-73204	ScreenFect™ A	1 mL×5
293-75901	ScreenFect™ mRNA	0.2 mL
299-75903	ScreenFect™ mRNA	1 mL
299-75001	ScreenFect™ siRNA	0.2 mL
295-75003	ScreenFect™ siRNA	1 mL
290-80203	ScreenFect™ UP-293	1 L用
294-80201	ScreenFect™ UP-293	100 mL用
191-18331	SFA P-reagent	100 μL
197-18333	SFA P-reagent	500 μL
194-18181	ScreenFect™ Dilution Buffer	50 mL