ISOSPIN Plant RNA 从植物组织提取RNA试剂盒

ISOSPIN Plant RNA用于从植物组织提取和纯化RNA。本产品的原理是在离液剂离子条件下，RNA吸附于二氧化硅。无需Phenol和Chloroform等有毒有机溶剂。所使用的离心柱最大限度地确保了柱容积，内封的硅胶模确保足够的RNA吸附容量和高洗脱率。

本试剂盒采用离心法去除杂物，在硅胶模上进行 DNase I 处理，提取和纯化高纯度RNA用时仅约１小时。

离心法去除杂物和硅基质膜上的 DNase I 处理能提取出高纯度RNA。

无需使用过滤器样品均匀化或过滤时后。本试剂盒用离心法去除杂物沉淀。

无需使用Phenol、Chloroform等有毒有机溶剂。

试剂盒内含有 DNase I （RNase free），不需另外购买。

ISOSPIN Plant RNA (50次用量)
产品	容量	保存	备注
PT Extraction Buffer	30 mL x 1支	室温
PT Binding Buffer	40 mL x 1支	室温	含乙醇
PT Wash1 Buffer	40 mL x 1支	室温	含乙醇（清洗液）
PT Wash2 Buffer	40 mL x 1支	室温	含乙醇（清洗液）
DNase I (RNase free)	2,000 units x 1支	-20°C
10× DNase I Buffer	1 mL x 1支	-20°C
ddWater (RNase free)	1 mL x 8支	室温	调制DNase I 溶液?洗提
离心柱	50 支 x 1袋	冷藏	上端组成：吸附柱 下端组成：收集管

NIPPON GENE提供直送服务，将室温品和冷藏品的试剂盒、－20°C的产品、放入干冰的泡沫箱一同放入纸箱，在常温下进行运输。

本产品可提取的RNA的回收量标准如下表。

菠菜（叶）	0.5 μg RNA/mg 组织
青花菜（芽）	1.0 μg RNA/mg组织
卷心菜（种子）	1.3 μg RNA/mg组织
卷心菜（芽）	1.4 μg RNA/mg组织
卷心菜（叶）	0.1 μg RNA/mg组织
竹子（叶）	0.3 μg RNA/mg组织
郁金香（球根）	0.2 μg RNA/mg组织

使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品按照步骤提取卷心菜的种子（约 4 mg）和叶（约 30 mg）的RNA。用吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板逆进行转录，使用GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX对获得的cDNA进行实时qPCR。

1.  样品量

·种子（约4 mg）

·叶（约30 mg）

2.  变性凝胶电泳

·凝胶：1% Agarose S（甲醛变性）

·RNA添加量：种子（1 μg）/叶（0.5 μg）

·RNA Ladder：与RNA添加量等量

3.  实时qPCR

·试剂：GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX

·装置：ABI 7500 Fast

·模板cDNA：以提取出的总RNA为模板进行逆转录

·扩增片段长度：441 bp

·实验次数： n=3

从吸收光谱结果看，在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低，说明本产品更能有效去除多糖类杂物（图1）。

卷心菜种子	卷心菜叶
图1 吸收光谱

		【RNA添加量】 种子（1 μg）／叶子（0.5 μg） 【Marker】 RNA Ladder(与RNA的添加量等量) 1% Agarose S（甲醛变性）
图2 变性凝胶电泳

卷心菜种子	卷心菜叶
图3 实时qPCR

【试剂】 GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX 【模板】 以提取出的总RNA为模板进行逆转录 【装置】ABI 7500 Fast 【扩增片段长度】441 bp 【循环数】n=3

红色：　ISOSPIN Plant RNA 绿色：　A公司产品

（淡竹培养细胞系Pn(rpc00047)形成）

使用ISOSPIN Plant RNA与其他公司产品，按照步骤对各样品量竹子愈伤组织提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆转录，使用 GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX 对获得的 cDNA 进行实时 qPCR。

※本实验使用的竹子愈伤组织由富山县立大学荻田信二郎博士（现公立大学法人县立广岛大学）提供。竹子愈伤组织委托理化学研究所 BioResource Center 获得的淡竹培养细胞系Pn（rpc00047）培养形成的。

1.  样品量

①　约 65 mg

②　约 50 mg

③　约 40 mg

2.  琼脂糖凝胶电泳

·凝胶：0.8% 琼脂糖 S/TAE

·RNA添加量：最终提取量的1/10（5 μL）

·Marker：OneSTEP Marker6（5 μL）

3.  实时qPCR

·试剂：GeneAce SYBR^® qPCR Mix α Low ROX

·装置：ABI 7500 Fast

·模板cDNA：以提取的总RNA为模板进行逆转录

·扩增片段长度：197 bp

·循环数： n=3

从吸收光谱结果看，在A230峰值上ISOSPIN Plant RNA比A公司低，说明更能有效去除多糖类杂物（图1）。根据琼脂糖凝胶电泳比较结果显示，ISOSPIN Plant RNA更有效提取出RNA（图2）。

图1 吸收光谱	图2 变性凝胶电泳

【凝胶】 0.8% 琼脂糖 S/TAE

【RNA添加量】 最终提取量的1/10（5 μL）

【Marker】 OneSTEP Marker6（5 μL）

图3 实时qPCR

【试剂】GeneAce SYBR® qPCR Mix α Low ROX 【装置】ABI 7500 Fast 【模板cDNA】以提取出的总RNA为模板进行逆转录 【扩增片段长度】197 bp 【循环数】n=3

使用 ISOSPIN Plant RNA 与B公司产品，按照步骤对郁金香球根（100 mg）提取RNA。通过吸收光谱和凝胶电泳对提取出的RNA进行比较。以提取出的总RNA为模板进行逆转录，使用 GeneAce SYBRR qPCR Mix α Low ROX 对获得的 cDNA 进行实时qPCR。

郁金香球根样品粘性高，提取困难。郁金香球根在液氮中碎成粉末状后，取1.5 mL移至离心管，并在各公司提取Buffer中用研磨棒磨碎，右图将离心管倒置比较溶液的粘性。

1. 样品量

100 mg

2. 琼脂糖凝胶电泳

RNA添加量：最终提取量的1/10（5 μL）

ISOSPIN Plant RNA 也能从粘性高的郁金香球根提取出RNA。

图1吸收光谱	最终提取量的1/10（5 μl） 图2 琼脂糖凝胶电泳

·　本产品仅用于实验研究，不能作医药及其他目的使用。

产品编号	产品名称	产品规格
310-08171	ISOSPIN Plant RNA	50次用量