CTGF ELISA 试剂盒

CTGF ELISA 试剂盒

 

结缔组织生长因子CTGF（Connective Tissue Growth Factor）是一种由脐静脉和血管内皮细胞产生的约38 kDa的分泌蛋白。除了参与细胞粘附和软骨细胞的增殖和分化以外，它也被认为是组织纤维化的一个主要因素，还可作为纤维化疾病的候选标志物。

FUJIFILM Wako可提供用于检测CTGF全长的ELISA试剂盒以及检测全长+N末端的ELISA试剂盒，通过组合使用这两种ELISA试剂盒，能够准确检测作为特发性肺纤维化（IPF）候选生物标志物的血液N末端CTGF片段。

CTGF（ Connective Tissue Growth Factor）是一种由脐静脉和血管内皮细胞产生的约38kDa的分泌蛋白。它是CCN (Cyr61/CTGF /Nov)家族的一种，亦称为CCN2。CTGF主要由Module 1 - Module 4的四个部分组成，Module 1称为IGF结合结构域，Module 2称为VWC结构域，Module 3称为TSP-1结构域，Module 4称为CT结构域。各结构域通过与不同的因子结合来发挥作用。

CTGF在组织纤维化中发挥重要作用，因此可作为纤维化的候选生物标志物。CTGF由TGF-β诱导表达，通过促进产生细胞外基质的肌成纤维细胞的分化和胶原蛋白的合成，从而参与纤维化^1）。在小鼠皮肤纤维化中，TGF-β和CTGF已被证明分别在纤维化的发生和持续中起重要作用^2）。此外，还有报告称CTGF与软骨细胞的增殖和分化，细胞间的粘连有关。

CTGF除了全长CTGF之外，还有Module 2 － Module 3间被切断产生的N末端(Module 1-2)CTGF和C末端(Module 3-4)CTGF。由于CTGF（C末端）容易被分解，所以血液中主要以CTGF （全长）和CTGF (N末端)的形式存在。CTGF (N末端)作为特发性肺纤维化(IPF: Idiopathic Pulmonary Fibrosis)的生物标志物备受期待³⁾，但由于CTGF（全长)和CTGF（N末端）同时存在，所以单独检测CTGF（N末端）非常困难。

96次用
抗体固相化孔板	1 plate
CTGF标准品	1支
缓冲液	20 mL
生物素结合抗体溶液	100 μL
过氧化物酶结合链霉亲和素溶液	100 μL
TMB溶液	12 mL
反应终止液	12 mL
清洗液（10×）	100 mL
标准品样品制备溶液	100 mL
孔板封条	4片

FUJIFILM Wako可分别提供检测CTGF全长以及全长+N末端的ELISA试剂盒。通过组合使用两种ELISA试剂盒，可准确检测特发性肺纤维化(IPF)的生物标志物——血液中的N末端CTGF⁴⁾。

产品名称	CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako	CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako
产品编号	290-84701	292-84901
检测对象	CTGF（全长）	CTGF（全长+N末端）
检测原理
样品	人血清，人血浆(EDTA)
标准曲线范围	7.81-500 pM
所需样品量	人血清：5 μL，人血浆(EDTA)：10 μL
检测时间	2 h 50 min
检测法	显色法

分别使用各ELISA试剂盒与全长，N末端片段，C末端片段反应，确认其交叉性。

CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako可以特异性检测CTGF全长，CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako可以特异性检测CTGF全长和N末端片段。

确认了包含CTGF在内的与CCN家族的交叉率（500 pM，n=8）。

	CTGF ELISA（全长） 交叉率 (%)	CTGF ELISA（全长+N末端区域） 交叉率 (%)
CCN1	<0.5	N.D.
CCN2（CTGF）	100	100
CCN3	<0.5	N.D.
CCN4	<0.5	N.D.
CCN5	<0.5	N.D.
CCN6	<0.5	N.D.

N.D. = 未检出

FUJIFIM Wako的试剂盒在CCN家族中，对CCN2(CTGF)显示高特异性。

样品ID	添加量 (pM)	检测值 (pM)	回收量 (pM)	回收率 (%)
人血清 样品15号	0	61.5	―	―
	10	71.4	9.9	99
	50	110	48.5	97
	100	163	102	102
	150	215	154	103
	300	370	309	103
			平均	101
人血浆（EDTA） 样品15号	0	71.5	―	―
	10	80.8	9.3	93
	50	121	49.5	99
	100	174	103	103
	150	227	156	104
	300	380	309	103
			平均	100

样品	添加量 (pM)	检测值 (pM)	回收量 (pM)	回收率 (%)
人血清 样品16号	0	37.8	―	―
	10	47	9.2	92
	50	87.4	49.6	99.2
	100	141	103	103
	150	191	153	102
	300	343	305	102
			平均	99.6
人血浆 (EDTA) 样品16号	0	16.9	―	―
	10	26.2	9.3	93
	50	65.6	48.7	97.4
	100	122	105	105
	150	173	156	104
	300	326	309	103
			平均	100

人血清	人血浆

人血清	人血浆

使用梯度稀释的人血清或人血浆(EDTA)，用CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako检测CTGF全长+N末端， 用CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako检测CTGF全长。求差值计算CTGF（N末端）量，确认稀释线性。

样品	稀释倍率	CTGF（全长＋N末端）（pM）	CTGF（全长）（pM）	CTGF（N末端）(pM）
人 血清	1/1	1735	952	783
	1/2	875	495	380
	1/4	417	237	180
人 血浆(EDTA)	1/1	684	126	558
	1/2	347	66.2	281
	1/4	157	34.9 * 参考值	122

使用该方法检测定量CTGF（N末端），可观察到高稀释线性。

使用CTGF（全长+N末端）ELISA试剂盒 Wako和CTGF（全长）ELISA试剂盒 Wako，检测从健康者以及特发性肺纤维化（IPF）患者中提取的血浆（EDTA），并求出N末端CTGF的量。

健康者
ID	CTGF（全长+N末端）（pM）	CTGF（全长）（pM）	CTGF（N末端）（pM）
1	494	83.4	411
2	535	116	419
3	580	155	425
4	661	129	532
5	383	63.5	319
		mean	421
		SD	75.6

IPF患者
ID	CTGF（全长+N末端）（pM）	CTGF（全长）（pM）	CTGF（N末端）（pM）
1	1226	213	1013
2	1004	187	817
3	432	35.4	397
4	1422	278	1144
5	938	39.9	898
6	682	73.2	609
7	1123	168	955
8	849	45.5	804
9	857	60.6	796
		mean	826
		SD	221

IPF患者血浆中N末端的CTGF量明显高于健康者。

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级
290-84701	CTGF(Full) ELISA Kit Wako CTGF (全长) ELISA试剂盒 Wako	96次用	免疫化学用
292-84901	CTGF(Full+N-terminal region) ELISA Kit Wako CTGF(全长+N末端) ELISA试剂盒 Wako	96次用	免疫化学用