胃泌素17（G-17）-磁微粒化学发光法（AE/AP） /荧光免疫层析解决方案（含保护剂评估）

胃泌素（Gastrin）是一种主要由胃窦和十二指肠的Ｇ细胞分泌的胃肠激素，对调节消化道功能和维持其结构完整有重要作用。人体中95％以上有生物活性的胃泌素是α-酰胺化胃泌素，主要含两种异构体G-17和G-34，其中80%~90%是由17个氨基酸残基所组成的G-17。G-17仅由胃窦部G细胞分泌，因此G-17是反映胃黏膜损伤情况的重要指标。以G-17作为核心指标的人体血清胃功能检测，属于一项无创、无痛且安全、经济的人体胃病检测方法。这种检测项目可以有效地减少胃癌患病风险，大幅度地提高胃癌疾病的早诊以及早治概率，对于各种胃病的预防和治疗都具有重要的积极意义。

《中国早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见（2014年）》：联合检测血清G-17、PG I、PG I/PGII比值及Hp抗体，以增加评估胃黏膜萎缩范围及程度的准确性。

《中国慢性胃炎共识意见2017年》明确血清胃蛋白酶原（PGI、PGII）以及G-17的检测有助于判断有无胃黏膜萎缩及其程度。

《中国早期胃癌筛查指南》（2017年）：胃功能三项检查结合内镜精查可以提高对胃癌的诊断率。

《慢性胃炎基层诊疗指南（实践版2019）》进一步明确血清胃蛋白酶原（PGI、PGII）以及G-17检测有助于慢性萎缩性胃炎的诊断。PGI、PGI/PGII比值降低，血清G-17水平升高，提示胃体萎缩为主；若PGI及PGI/PGII比值正常，血清G-17水平降低，提示胃窦萎缩为主；全胃萎缩者，PG及G-17均降低。

针对胃泌素17（G-17）的检测，西宝生物推出4种单克隆抗体和1种抗原，适合化学发光（AE/AP）和荧光层析平台。具体性能如下

（以下评估仅代表在西宝生物的工艺体系下的验证，建议客户根据自身工艺进行抗体交叉配对验证）。

线性范围：0.5pmol/L-500pmol/L；最低检出限：0.5pmol/L。

浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

线性范围：0.5pmol/L-500pmol/L；最低检出限：0.5pmol/L。

浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

线性范围：0.5pmol/L-500pmol/L；最低检出限：0.5pmol/L。

浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

线性范围：0.5pmol/L-100pmol/L；最低检出限：0.5pmol/L。

浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

线性范围：0.5pmol/L-100pmol/L；最低检出限：0.5pmol/L。

浓度值在50000pmol/L以内没有发现高剂量钩状效应(HOOK效应)。

采用胃泌素17（G-17） AE发光稀释液（货号：DCD0523A）将胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被羧基磁珠浓缩液、胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记吖啶酯浓缩液稀释成磁珠工作液及吖啶酯工作液，进行37℃热稳定性实验。如表1所示：

a. G-17吖啶酯工作液、磁珠工作液单独37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化在±5%以内，表明G-17吖啶酯工作液及磁珠工作液热稳定性良好；

b. G-17吖啶酯工作液+磁珠工作液联合37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均变化也在±5%以内，表明G-17试剂热稳定性良好。

序号	G-17抗原稀释浓度pmol/L	G-17 吖啶酯工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异	G-17 磁珠工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异	G-17 吖啶酯工作液+磁珠工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异
S0	0	4.9%	-5.9%	6.2%
S1	0.5	6.0%	-5.0%	1.8%
S2	1	0.2%	-0.1%	-5.0%
S3	5	-0.3%	2.5%	5.5%
S4	25	4.7%	-1.4%	5.6%
S5	100	5.6%	1.9%	5.6%
S6	500	4.5%	2.1%	1.6%
S7	1000	3.9%	0.4%	0.5%
平均变化		3.7%	-0.7%	2.7%

A）胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记碱性磷酸酶浓缩液采用AP酶标记物稀释液（货号：DCD0519A）稀释到合适浓度后，进行37℃热稳定性实验。如表1所示，G-17 ALP酶工作液37℃储存热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值平均降幅超过30%以上，表明G-17 ALP酶工作液热稳定性差。

表2 G-17 ALP酶工作液热稳定性3天数据（不含保护剂）

序号	G-17抗原稀释浓度pmol/L	G-17 ALP酶工作液37℃热加速3天与2℃-8℃储存3天发光值均值差异
S0	0	-10.8%
S1	0.5	-31.1%
S2	1	-41.1%
S3	5	-38.2%
S4	25	-33.3%
S5	100	-34.7%
S6	500	-25.8%
S7	1000	-27.0%
平均变化		-30.3%

B）在AP酶标记物稀释液（货号：DCD0519A）中添加20%左右的蛋白保护剂GH（货号：DCL0009A）配成新的AP酶稀释液，继续进行胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记碱性磷酸酶的37℃热稳定性实验。如表2所示，G-17 ALP酶工作液37℃储存热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值平均降幅在±5%左右，表明G-17 ALP酶工作液热稳定性良好。本实验表明蛋白保护剂GH（货号：DCL0009A）对G-17 ALP酶工作液的稳定性有很大帮助。

表3 G-17 ALP酶工作液热稳定性7天数据（含保护剂）

序号	G-17抗原稀释浓度pmol/L	G-17 ALP酶工作液37℃热加速7天与2℃-8℃储存7天发光值均值差异
S0	0	1.8%
S1	0.5	-4.3%
S2	1	-1.5%
S3	5	-3.8%
S4	25	-6.1%
S5	100	-2.3%
S6	500	-3.0%
S7	1000	-3.0%
平均变化		-2.8%

2.4.3 G-17抗原稳定性

采用G-17抗原稀释液（货号：DCD0522A）将G-17抗原（货号：EDD0791A）稀释成7个梯度（液体型），进行37℃热稳定性实验。如表4所示：

c. G-17抗原稀释梯度（液体型）2℃-8℃储存7天与-20℃储存7天发光值平均降幅在5%以内，表明G-17抗原稀释梯度（液体型）2℃-8℃储存稳定性良好；

d. G-17抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天与-20℃储存7天发光值平均降幅超5%以内，表明G-17抗原稀释梯度（液体型）热稳定性良好。

序号	G-17抗原稀释浓度pmol/L	G-17 抗原稀释梯度（液体型）2-8℃热加速7天与-20℃储存7天发光值均值差异	G-17 抗原稀释梯度（液体型）37℃热加速7天与-20℃储存7天发光值均值差异
S0	0	3.3%	6.0%
S1	0.5	3.5%	-8.3%
S2	1	-3.4%	0.4%
S3	5	1.3%	-7.1%
S4	25	0.7%	-9.4%
S5	100	0.2%	-2.7%
S6	500	2.0%	1.4%
S7	1000	-3.1%	0.5%
平均变化		0.6%	-2.4%

西宝生物发光（AE）平台G-17抗体配对组合1（两试剂模式）与亚辉龙G-17试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好；

西宝生物发光（AE）平台G-17抗体配对组合2（三试剂模式）与亚辉龙G-17试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好。

西宝生物发光（AP）平台G-17抗体配对组合3（两试剂模式）与亚辉龙G-17试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好；

西宝生物荧光平台G-17抗体配对组合4与亚辉龙G-17试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好；

西宝生物荧光平台G-17抗体配对组合5与亚辉龙G-17试剂（化学发光法）赋值的临床样本相关性R²>0.95，相关性良好；

待测抗原:胃泌素17(G-17)重组抗原（货号：EDD0791A）

样本/校准品:样品加样量20ul；

试剂1：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入预激发液及激发液，进行测试。

待测抗原:胃泌素17(G-17)重组抗原（货号：EDD0791A）

样本/校准品:样品加样量20ul；

M试剂：链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）稀释物，用量50ul/测试；

试剂1：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）标记-生物素稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记-吖啶酯稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样本+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min；

第二步：加入50ul M试剂混合，37℃孵育5min，清洗；

第三步：加入预激发液及激发液，进行测试。

待测抗原：胃泌素17(G-17)重组抗原（货号：EDD0791A）

样本/校准品:样品加样量20ul；

试剂1：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被-磁珠稀释物，用量50ul/测试；

试剂2：胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记-碱性磷酸酶稀释物，用量50ul/测试；

反应条件：

第一步：20ul样品+50ul试剂1+50ul试剂2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，进行测试。

待测抗原:胃泌素17(G-17)重组抗原（货号：EDD0791A）

反应条件：

样品+稀释液混匀（本次按照1:2稀释），上样，反应时间（10min-15min）；

产品名称	货号	推荐配对
AE发光稀释液	DCD0523A	/
AP酶标记物稀释液	DCD0519A	/
蛋白保护剂GH	DCL0009A	推荐使用浓度20%左右
胃泌素17（G-17）抗原稀释液	DCD0522A	/
胃泌素17（G-17）抗体	EKY0901B	胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记吖啶酯（配对组合1） 胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）标记生物素+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记吖啶酯+链酶亲和素磁珠（SA）（货号：DEG0814A）（配对组合2） 胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记碱性磷酸酶（配对组合3） 胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901C）标记荧光微球+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902C）划膜（配对组合4） 胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902C）标记荧光微球+胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901C）划膜（配对组合5）
胃泌素17（G-17）抗体	EKY0902B
胃泌素17（G-17）抗体	EKY0901C
胃泌素17（G-17）抗体	EKY0902C
胃泌素17(G-17)重组抗原	EDD0791A
胃泌素17（G-17）抗体 （货号：EKY0901B）包被羧基磁珠浓缩液	DKY1336A
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901B）标记生物素浓缩液	DKY1336B
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记吖啶酯浓缩液	DKY1336C
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902B）标记碱性磷酸酶浓缩液	DKY1336D
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0901C）标记荧光微球浓缩液	DKY1336E
胃泌素17（G-17）抗体（货号：EKY0902C）标记荧光微球浓缩液	DKY1336F
AMPPD 发光底物液（即用型）	DCD0517A
AMPPD 发光底物液（即用型）	DCD0517B
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C
链霉亲和素磁性微球，1.5um	DEG0814A-10ml
时间分辨荧光微球，羧基（200nm）	AEG0786B