质谱级 赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase

赖氨酰肽链内切酶（Lysyl Endopeptidase）初期由Masaki等人从土壤细菌中分离得到。该酶可以特异性剪切除赖氨酸残基C末端和S-氨乙基半胱氨酸残基的肽键，用于蛋白测序和Lys-X 化合物的酶催化合成。作为Wako官方授权分销商，西宝生物专业提供Wako多种级别赖氨酰肽链内切酶，该酶稳定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小时之后，仍然拥有完整的生物活性。订购热线：400-021-8158

质谱级赖氨酰肽链内切酶是质谱分析前处理时常用的蛋白分解酶。若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶，可更好地切断赖氨酸基团的多肽，增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装，是方便使用的冷冻干燥品。

表1赖氨酰肽链内切酶理化特性表

外观	冻干粉（包含2 mmol/L Tris-HCl buffer，pH 8）	活性	0.03~0.07AU/vial
分子量	27,000（凝胶过滤）；30,000 (SDS-PAGE)	溶解性	易溶于水或缓冲液
较佳pH	9.0-9.5（酰胺酶的较佳活性pH）	等电点	6.9-7.0
抑制剂	DFP、PMSF、TLCK	来源	细菌
稳定性	溶于pH 值5.0-12.0 的Tris缓冲液中，可于4℃稳定保存2年。溶于pH 值6.0-11.0 的缓冲液中，可于30℃稳定保存，但是50℃及以上不稳定。
单位定义	一单位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH 9.5 时每分钟产生1 μmol p-Nitroaniline所需的酶量。
底物特异性	水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
	非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA

 

分别采用胰蛋白酶(Tp)、赖氨酰肽链内切酶(Lep) 和Tp 与Lep联用进行胶内酶切的效果比较：牛血清蛋白BSA 的条带(100ng) 通过SDS-PAGE 获得，然后分别用Tp、Lep 和Lep+Tp 进行酶切，再用MALDI-TOFMS 法进行分析。蛋白酶的实验效果如下表：

表2 Tp、Lep 和 Lep+Tp 的蛋白酶酶切结果对照

	Tp	Lep	Lep +Tp
裂解位点	精氨酸和赖氨酸的C端	赖氨酸的C端	精氨酸和赖氨酸的C端
错误裂解率  (错误裂解所占比例)	多(8%)	很少(0%)	少(3%)
鉴定出的多肽数量	17	19	22

结果表明 Lep 酶解的错误裂解率低，Tp酶解时加入Lep后，错误裂解率有所降低，同时，可以鉴定出更多的多肽。

Lep+Tp酶切后，可以在m/z=2000时得到吸收峰，而单独的Tp酶切在m/z=2000时没有吸收峰。该结果表明Lep可以提高测序覆盖度。

( 数据由大阪医疗中心和妇婴健康研究所Y. Wada博士提供 )

品牌	产品编号	产品名称	产品规格	产品等级
Wako	121-05063	Lysyl Endopeptidase, MS Grade 赖氨酰肽链内切酶，MS级	20μg	质谱级
Wako	125-05061	Lysyl Endopeptidase, MS Grade 赖氨酰肽链内切酶，MS级	20μgx5	质谱级
Wako	125-02543	Lysyl Endopeptidase (R) 赖氨酰肽链内切酶	1vial(2AU)	for Biochemistry
Wako	129-02541	Lysyl Endopeptidase (R) 赖氨酰肽链内切酶	1vial(10AU)	for Biochemistry

1. Wada, Y., and Kadoya, M.: J. Mass Spectrom., 38, 117 (2003).
2. Shevchenko, A., Wilm, MM., Vorm, O., and Mann., M.: Anal. Chem., 68, 850 (1996).

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