Seebio(R) 高活性重组碱性磷酸酶（ALP）

碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AP)是一种膜结合糖蛋白。AP在自然界中广泛分布，包括原核生物和更高的真核生物。其活性位点中包括两个锌离子和一个镁离子，这三个位点的金属离子对于酶活性至关重要。碱性磷酸酶可以水解各种单磷酸酯，并释放无机磷酸盐。1,2-二氧杂环丁火完化合物AMPPD作为一种超灵敏的碱性磷酸酶底物，在碱性磷酸酶的催化作用下，磷酸根基团水解，形成一个不稳定的中间体，自行分解后四元环断裂释放出大量能量，从而激发化学发光反应。因此磁珠-抗体偶联物与碱性磷酸酶-抗体偶联物在化学发光试剂盒中可作为固相捕获试剂和酶标试剂用于检测血清中的痕量抗原。与辣根过氧化物酶(HRP)相比，碱性磷酸酶具有稳定性和高敏感性的优势。AP在生物学尤其是分子生物学和免疫学领域有着广泛的应用。

随着酶促化学发光检测技术的发展，酶偶联抗体及其偶联方法受到广泛关注。目前常用的碱性磷酸酶偶联方法有SMCC异性双功能偶联法、过石典酸钠氧化法、碳二亚胺法和等。过石典酸钠氧化法是先将酶进行醛基化，然后和抗体偶联，这种操作比较复杂，偶联产物有效活性浓度低。碳二亚胺法利用碳二亚胺类物质对蛋白质进行羧基化，这种方法容易形成蛋白分子间的自身聚合，产生非均一性产物。SMCC异性双功能偶联法利用SMCC的异性官能团，分别连接碱性磷酸酶和抗体，这种方法相比过石典酸钠法和碳二亚胺法偶联效率高。

《BIOCONJUGATE TECHNIQUES》中介绍了部分SMCC法标记酶的原理：

a）SMCC与酶分子上的胺基反应产生马来酰亚胺活化衍生物，能够与含巯基的抗体分子偶联（如图一所示）；

b）抗体可以在其胺基上用2-亚氨基硫火完修饰，以形成与SMCC活化酶结合的巯基。衍生化酶上的马来酰亚胺基团与抗体上的硫醇反应形成硫醚键（如图二所示）。

图1 SMCC活化酶

图2 抗体活化及连接酶

西宝生物创新研发团队依托现有技术平台自主研发生产的ALP碱性磷酸酶产品，性能稳定、活性高，可完美替代进口品牌，且经众多客户的反复测评得到了大家的一致认可。此酶在化学发光平台经过多个临床项目验证，信噪比、精密度、稳定性等与进口品牌性能持平。欢迎索样测试，服务热线：400-021-8158

产品编号	DCE0108L
产品名称	Alkaline Phosphatase recombinant（Highly Active）  Seebio® 重组碱性磷酸酶（高活性）
EC 号	3.1.3.1
Cas号	9001-78-9
来源	Bovine intestinal mucosa 小牛肠粘膜
比活	≥7000U/mg
纯度	≥96%（HPLC）
表达	CHO-K1
分子量	≈62kDa
糖基化	18±5%
外观	澄清液体
规格	5mg，10mg，50mg, 100mg
浓度	14-21mg/ml（具体参考随货COA）
储存缓冲液	3MNaCl，5mMMgCl2，0.2mMZnCl2，30mMTEA，PH7.6
酶活定义	在37℃、pH 9.5条件下，一个单位的碱性磷酸酶每分钟能够水解对石肖基苯酉分磷酸盐（pNPP）产生1µmol对石肖基苯酉分（pNP）。
储存运输	Store at 2°C to 8°C. DO NOT FREEZE.

Ø 在免疫系统中重组碱性磷酸酶ALP偶联到蛋白上(抗体、链霉亲和素等) ,识别目标分子（底物）;

Ø 在分子生物学系统中ALP用在DNA或RNA的5'-末端去磷酸以防止自连;

Ø 经ALP去磷酸化作用后, DNA或RNA还可被放射性标记磷酸盐标记(通过T4多核苷酸激酶) ;

Ø ALP还常用来蛋白的去磷酸化实验，比如酪蛋白和核酸等；

u 性价比高，可直接平替进口品牌

u 包装规格灵活适合研发到生产

u 精密度、信噪比良好

u 比活性高，性能优异

分别采用进口R品牌-2103 ALP酶及西宝自产三个批次ALP酶（货号：DCE0108L）标记人白介素6（IL-6）抗体（货号：EKY0129D），搭配磁珠（货号：DEG0814A）包被人白介素6（IL-6）抗体1（货号：EKY0129Z）测试40例临床样本（罗氏IL-6电化学发光试剂盒赋值）及测试精密度。

由表1数据可知，进口R品牌-2103 ALP酶标记IL-6抗体及西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试临床相关性r分别为0.996、0.998、0.997、0.997，表明西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试临床相关性良好；此外，西宝三个批次ALP酶分别与进口R品牌-2103 ALP酶测试IL-6样本的平均偏差分别为4.9%、3.7%、6.8%，表明西宝三个批次ALP酶与进口R品牌-2103 ALP酶差异很小。

由表2数据可知，进口R品牌-2103 ALP酶标记IL-6抗体及西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试IL-6样本精密度分别为1.6%、1.1%、2.4%、2.0%，表明西宝三个批次ALP酶标记IL-6抗体测试临床样本精密度良好。

分别采用进口R品牌-2103 ALP酶及西宝自产三个批次ALP酶（货号：DCE0108L）标记胃蛋白酶原（PGI）单抗（货号：EKN0288E），搭配磁珠（货号：DEG0800C）包被胃蛋白酶原（PGI）单抗（货号：EKN0287E）测试40例临床样本（迈瑞PGI化学发光试剂盒赋值）及测试精密度。

由表3数据可知，进口R品牌-2103 ALP酶标记PGI抗体及西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试临床相关性r分别为0.982、0.986、0.985、0.983，表明西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试临床相关性良好；此外，西宝三个批次ALP酶分别与进口R品牌-2103 ALP酶测试PGI样本的平均偏差分别为10.3%、6.4%、10.4%，表明西宝三个批次ALP酶与进口R品牌-2103 ALP酶差异很小。

由表4数据可知，进口R品牌-2103 ALP酶标记PGI抗体及西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试PGI样本精密度分别为1.5%、2.1%、1.7%、1.7%，表明西宝三个批次ALP酶标记PGI抗体测试临床样本精密度良好。

采用西宝ALP酶（货号：DCE0108L）分别对25-羟基维生素D（双抗夹心法）、幽门螺杆菌(HP.CagA)、胃蛋白酶原I（PGI）、D-二聚体（D-Dimer）、血栓调节蛋白（TM）、白介素-6（IL-6）、血清淀粉样蛋白A（SAA）、糖类抗原125(CA125)、肌红蛋白（Myo）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）等项目进行验证，临床效果表现良好，具体详情请参考西宝生物相关免疫诊断解决方案。

产品名称	货号	推荐配对
胃蛋白酶原（PGI）抗体	EKN0287E	胃蛋白酶原（PGI）单抗（货号：EKN0287E）包被羧基磁珠+胃蛋白酶原（PGI）单抗（货号：EKN0288E）标记碱性磷酸酶
胃蛋白酶原（PGI）抗体	EKN0288E
胃蛋白酶原（PGI）抗原	EKY0731B	校准、质控抗原
胃蛋白酶原（PGI）单抗（货号：EKN0287E）包被羧基磁珠浓缩液	DKY1331H	浓缩液
胃蛋白酶原（PGI）单抗2（货号：EKN0288E）标记碱性磷酸酶浓缩液	DKY1331I	浓缩液
白介素-6（IL-6)抗体	EKY0129Z	白介素-6（IL-6)抗体1（货号：EKY0129Z）包被羧基磁珠+白介素-6（IL-6)抗体2（货号：EKY0129D）标记碱性磷酸酶
白介素-6（IL-6)抗体	EKY0129D
白介素6 (IL-6)重组抗原	EKY0140B	校准、质控抗原
白介素-6（IL-6)单抗1（货号：EKY0129Z）包被羧基磁珠浓缩液	DKY1321F	浓缩液
白介素-6（IL-6)单抗2（货号：EKY0129D）标记碱性磷酸酶浓缩液	DKY1321G	浓缩液

产品编号	产品名称	订购规格
DCE0108L	Seebio® 重组碱性磷酸酶（高活性）	5mg，10mg，100mg
DCD0517B	AMPPD 发光底物液（即用型）	100ml
DEG0800C	羧基磁性微球，1.5um	10ml
DEG0814A	链霉亲和素磁性微球，1.5um	10ml
ECV0336B	生物素Biotin-NHS	50mg，100mg
EJL1164A	4-(N-马来酰亚胺甲基)环己火完羧酸 -N-琥珀酰亚胺酯（SMCC）	250mg
DCS0005C	4-(N-马来酰亚胺甲基)环己火完-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐（Sulfo-SMCC）	25mg
AJL0806C	2-亚氨基硫杂环戊火完盐酸盐	100mg
AJL0617A	马来酰亚胺	5g
ACP0005A	甘氨酸	500g、1kg，25kg
DCL0001A	牛血清白蛋白(第五组分)	100g，250g，500g
DCL0001B	牛血清白蛋白(第五组分,无蛋白酶)	5g，100g，500g
DCL0001D	牛血清白蛋白(第五组分,无蛋白酶,低脂肪酸)	25g，100g，500g
DCL0001S	牛血清白蛋白(第五组分)	100g，500g，1kg
DCL0001T	牛血清白蛋白(无蛋白酶，低脂肪酸，低IgG，低内毒素)	100g，1kg
AYY2828A	酪蛋白	25g，100g
ACH0027A	Tween 20	100ml，500ml，1L，5L
ACH0028A	Tween 80	100ml，500ml，1L，5L
ACH0026A	Triton X-100	100ml、500ml、1L
ACH0056D	Triton X-450	50ml，500ml
ACH0003B	聚环氧乙火希月桂酰醚,Brij-35	100g，500g，1kg
ACC0030B	三羟甲基氨基甲火完<结晶>(Tris base)	50g，100g，1kg
ACC0016A	2-(N-吗口林代)乙火完磺酸一水(MES)	100g，500g，1kg
ACC0017A	3-(N-吗口林代)丙磺酸(MOPS)	100g，1kg
ACC0013A	N-2-羟乙基哌口秦-N'-2-乙磺酸(HEPES)	25g，500g，1kg
ACN0037B	Krovin 300防腐剂	25ml，100ml，500ml，5L
ACN0917A	Krovin 360防腐剂	25ml，100ml，500ml，5L
ACN0046A	Krovin 500防腐剂	25ml，100ml，500ml，5L
ACN0043B	Krovin 950防腐剂	25ml，100ml，500ml，5L
DJL0145B	三(2-羰基乙基)磷盐酸盐（TCEP）	5g，100g，500g