化学发光标记物-碱性磷酸酶（ALP）性能稳定活性高，替代进口优选

背景介绍

碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AP)是一种膜结合糖蛋白，分子量约140KDa。AP在自然界中广泛分布，包括原核生物和更高的真核生物。其活性位点中包括两个锌离子和一个镁离子，这三个位点的金属离子对于酶活性至关重要。碱性磷酸酶可以水解各种单磷酸酯，并释放无机磷酸盐。1,2-二氧杂环丁火完化合物AMPPD作为一种超灵敏的碱性磷酸酶底物，在碱性磷酸酶的催化作用下，磷酸根基团水解，形成一个不稳定的中间体，自行分解后四元环断裂释放出大量能量，从而激发化学发光反应。因此磁珠-抗体偶联物与碱性磷酸酶-抗体偶联物在化学发光试剂盒中可作为固相捕获试剂和酶标试剂用于检测血清中的痕量抗原。与辣根过氧化物酶(HRP)相比，碱性磷酸酶具有稳定性和高敏感性的优势。AP在生物学尤其是分子生物学和免疫学领域有着广泛的应用。

随着酶促化学发光检测技术的发展，酶偶联抗体及其偶联方法受到广泛关注。目前常用的碱性磷酸酶偶联方法有过石典酸钠氧化法、碳二亚胺法和SMCC异性双功能偶联法等。过石典酸钠氧化法是先将酶进行醛基化，然后和抗体偶联，这种操作比较复杂，偶联产物有效活性浓度低。碳二亚胺法利用碳二亚胺类物质对蛋白质进行羧基化，这种方法容易形成蛋白分子间的自身聚合，产生非均一性产物。SMCC异性双功能偶联法利用SMCC的异性官能团，分别连接碱性磷酸酶和抗体，这种方法相比过石典酸钠法和碳二亚胺法偶联效率高。

西宝生物提供高质量的AP原料，性能稳定、活性高，精准助力免疫诊断试剂产品的开发，受到国内外广大客户朋友的肯定与支持。

表1  AP酶参数

参数	罗氏AP酶对照	西宝DCE0108K酶
保存条件	2-8℃	2-8℃
规格	20±1mg/mL	20±1mg/mL
比活性	＞7000U/mg	＞7000U/mg
稳定性	45℃	45℃
糖基化	≤7%	≤7%
来源	重组	重组
纯度	＞95%	＞95%

性能对比

2.1 直接测试酶活

2.1.1实验步骤

a）分别选择一批次罗氏AP酶及西宝DCE0108K酶，根据其标识浓度分别配制成表2的6个浓度；
b）将配制好的酶结合物每孔10uL加入包被的发光板中，每个浓度3次重复；
c）向b）中分别加入100uL AMPPD发光底物，在酶标仪上测试发光值。

2.1.2 实验结果

当AP浓度介于浓度1-浓度6时，两者的发光值均值偏差在±20%范围内，表明西宝AP-01酶与罗氏AP酶测试性能相当。

表2 AP酶活比对（直接测试）

AP酶浓度	罗氏酶发光值均值	西宝DCE0108K酶发光值均值	西宝与罗氏 偏差
浓度6	1572599	1605305	2.1%
浓度5	1311183	1530485	16.7%
浓度4	131399	147823	12.5%
浓度3	10433	10318	-1.1%
浓度2	1096	1040	-5.1%
浓度1	613	841	37.1%
0	333		/

2.2 标记抗体测试酶活（SMCC偶联法）

2.2.1实验步骤

a) 抗体1包被；
b) 罗氏酶及西宝DCE0108K酶分别标记抗体2（SMCC偶联法）；
c）配置7个浓度校准品；
d）加样，每个浓度3次重复，孵育及洗涤；
e）在洗涤完成的板中分别加入100uL AMPPD发光底物，在酶标仪上测试发光值。

2.2.2 实验结果

表3 AP酶活比对（标记测试）

校准品	罗氏酶发光值均值	西宝AP-01发光值均值	西宝与罗氏酶偏差
校准品7	1187535	1402472	18.1%
校准品6	1034131	1197433	15.8%
校准品5	743609	892830	20.1%
校准品4	138820	186484	34.3%
校准品3	17832	22757	27.6%
校准品2	2740	3663	33.7%
校准品1	606	823	35.8%
0	450		/

当AP浓度介于校准品1-校准品7时，西宝DCE0108K酶测试发光值均高于罗氏AP酶发光值。这表明，在标记抗体时，西宝DCE0108K酶性能优于R酶。

西宝生物碱性磷酸酶的灵敏度、重复性以及稳定性性能优越可完美替代进口产品，为体外诊断IVD研发生产企业降本赋能。

产品订购信息：

产品名称	货号	推荐应用
碱性磷酸酶ALP	DCE0108K	诊断标记用酶
Alkaline Phosphatase, EIA Grade	10556602103	Specific activity (+37°C, 4-NPP): ≥3,000 U/mg
Alkaline Phosphatase, recombinant, highly active	03137031103	Specific activity (+37°C, 4-NPP): ≥7,000 U/mg