去除融合蛋白标签的蛋白酶——看这里

大家好，我是蛋白工具酶家族的新成员，我的名字叫“重组烟草蚀纹病毒蛋白酶（rTEV Protease）”，今天跟大家做个自我介绍：

重组TEV蛋白酶（rTEV Protease）经过基因工程改造，在大肠杆菌中重组表达，带His标签(6X His tag)，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEVProtease是一种用来切除融合蛋白上标签序列的常用工具酶，较EK、SUMO等蛋白酶的位点专一性更强，具有高活性和高特异性的特点，。

品牌	货号	包装规格	比活
Seebio®	EBY3644A-1KU	酶：1×1KU、Buffer：1×1.5ml	1U/μL
Seebio®	EBY3644A-5KU	酶：1×5KU、Buffer：2×1.5ml	5U/μL
Seebio®	EBY3644A-10KU	酶：2×5KU、Buffer：4×1.5ml	5U/μL

严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。其序列专一性远比凝血酶、因子xa、肠激酶等蛋白酶高。TEV蛋白酶可在广泛pH（6.0-8.5）和温度（4-30℃）内进行酶切，使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。rTEV酶在pH 7.0，30℃时可达到最佳活性。

用于切除重组蛋白的融合标签。rTEV酶的N端含有6×His，酶切结束后可以通过Ni2+亲和层方便地去除rTEV，以达到纯化目的蛋白的目的。

来源（Source）	大肠杆菌重组表达
外观（Appearance）	无色透明液体
分子量	27.8kDa
比活力（Specific Activity）	1U/μL 5U/μL
活性定义（Unit Definition）	在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反应1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
纯化（Purification）	色谱纯化
纯度（Purity）	≥95%（by SDS-PAGE）
产品组成	25mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT, 50%(v/v)Glycerol, pH8.0。

表1. 不同温度下rTEV酶切活性

反应时间（h）	不同温度下剪切活性（%）
	4℃	16℃	21℃	30℃
1	34	58	56	70
2	58	80	78	90
3	71	99	99	99
3.5	84	99	99	99

组分	用量
融合蛋白	30μg
rTEV Protease (1 U/μL)	10μL
rTEV buffer（10×）	10μL
ddH2O	随终体积变动

1.按如上表格配制反应体系。
 2.混匀后在30℃条件下温育，分别在1h、2h、4h、6h后取样，置于单独的EP管中。
 3.向上述EP管中加入适量的 5×SDS Loading Buffer，-20℃保存至酶切完成。
 4.取酶切样品进行SDS-PAGE电泳分析，确定酶切效果，调整所需的合适酶量和反应时间。
 5.如果目的蛋白在30℃不稳定，可以于4℃反应过夜(16小时左右)。

低温运输，-20℃保存，有效期≥2年。

1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），PestatinA（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响；

2）Zn2+浓度（>5 mM）对rTEV活性有抑制作用；

3）与半胱氨酸反应的试剂，也是rTEV的潜在抑制剂。

Q：该产品有何优点？
 A：重组型TEV 蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅有天然 TEV 酶活性，同时不会出现天然TEV酶的自我酶解问题，在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。

Q：该产品可用于什么实验？、
 A：rTEV 是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性。

Q：该产品的最适酶切时间和温度是多少？
 A：16-30℃下反应 3-3.5h 最好。

Seebio® TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性测定试剂盒（荧光法）

货号	中文名称	包装规格
EKM0101B-50T	Seebio® TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性测定试剂盒（荧光法）	50T

货号	中文名称	包装规格
ECL0019H-10mg	重组蛋白A（rProtein A）-层析填料专用	10mg
ECL0019H-100mg	重组蛋白A（rProtein A）-层析填料专用	100mg
ECL0019H-1g	重组蛋白A（rProtein A）-层析填料专用	1g
ECL0019H-1kg	重组蛋白A（rProtein A）-层析填料专用	1Kg

货号	中文名称	包装规格
ECE1123A	重组肠激酶	100U
ECE0616D-1KU	凝血酶	1KU（2000U/mg）
AJL0940C	Seebio® 线性聚乙火希亚胺（PEI 40,000）	10mg