抗体亲和层析-高纯度重组蛋白A（Seebio® rProtein A）

单克隆抗体在目前仍是广泛使用的生物治疗药物。Protein A 填料具有高亲和性、可操作性、可放大性以及法规记录，因此几乎所有商业批准的 mAb 制造工艺均使用 Protein A 填料捕获作为下游纯化的初始步骤。Seebio为更好地适应客户的需求，对蛋白 A 填料产品不断升级改造，推陈出新。

蛋白A（Protein A）

蛋白A (Staphylococcus Protein A，简称SPA)是金黄色葡萄王求菌(Staphylococcus aureus)的一种膜蛋白，具有与抗体特异性结合的能力，蛋白A亲和层析柱已成为应用广泛的纯化抗体的亲和柱，可从腹水、血清和细胞培养上清或细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。

天然蛋白A结构稳定，不耐酸碱，分子内部不存在二硫键，拥有5个高度同源的区域，与IgG有结合作用。蛋白A与多种来源的IgG都有很强的亲和力，结合位点位于IgG的Fc段，不影响IgG结合抗原的活性。目前，以蛋白A为亲和配基的亲和层析介质已广泛应用于单克隆抗体和Fc重组融合蛋白的纯化。

   图1：金黄色葡萄王求菌 Protein A    

Protein A 填料作为抗体纯化的核心步骤，在纯化过程中需要进行在位清洗 (clean-in-place, CIP)以达到重复利用的目的，节省高昂的层析介质成本。NaOH (0.1-0.5 M)溶液是最有效的清洁剂，但天然 Protein A 受其序列限制不能耐受高浓度的碱液清洗。往往导致蛋白A的变性和脱落。

西宝生物成通过基因重组改造，去除了天然ProteinA中的IgG非结合区，仅由Fc结合区组成，同时经突变改造，并引入了抗蛋白酶的链接子降低空间位阻，使rProteinA有了更高的动态结合容量，显著提高了耐酸碱处理能力。经层析纯化获得。纯化过程不使用抗体柱亲和层析，避免产品中掺入无关IgG。    

Seebio® 重组蛋白A（rProtein A）简介    

产品名称	Seebio® 重组蛋白A（rProtein A）
英文名称	Recombinant Protein A
货号	ECL0019H
Purity（SDS-PAGE）	≥95%
来源	E.coli
分子量	28.2kDa
外观	冻干粉末
标签	His标签

Seebio®重组蛋白A特性与用途

Seebio重组蛋白A的C末端含有半胱氨酸，可定向偶联到固体分离介质上，用于单克隆抗体或多克隆抗体的纯化。可结合大多数人或小鼠免疫球蛋白子类(如人IgG1、IgG2、IgG4；小鼠IgG2、IgG2a、IgG2b、IgG3)，还可结合牛、仓鼠、兔的总免疫球蛋白。

Seebio重组蛋白A可与多种报告分子(荧光染料、酶标记、生物素、胶体金、放射性标记等)偶联而不影响其与抗体结合的活性。这些偶联后的蛋白A衍生物可用于Western blot、ELISA、免疫组化等的抗体检测。

Seebio®重组蛋白A优势

1. 非抗体柱纯化，产品中无任何其它抗体如IgG等的污染。
2. 可耐受0.5 M NaOH和0.5M HCl 处理，不降解，抗体结合能力不变
3. 高PH洗脱，降低IgG聚集。
4. 产品有特为抗体纯化柱设计的连接基团，可直接用于蛋白A柱的制备。
5. 质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。
6. 纯度高：宿主蛋白残留小。
7. 冻干粉：易于储存和运输；
8. 符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循 ISO 9001质量体系。

Seebio®重组蛋白A产品说明    

稳定性：重组蛋白A冻干粉存储于2-8℃，24个月稳定；偶联时用PBS (pH7.4)溶解，现配现用；用水溶解后，-20℃以下保存。

储存：2-8℃ 储存，不可冻存。

产品列表    

货号	中文名称	包装规格
ECL0019H	Seebio® 重组蛋白A（rProtein A）-层析填料专用	10mg
		100mg
		1g
		1kg

附表：Protein A、Protein G、Protein L结合抗体能力比较

物种	亚类	Protein A	Protein G	ProteinL
人	IgG	+++	+++	+++
	IgG1	++++	++++	++++
	IgG2	++++	++++	++++
	IgG3	-	+++	+++
	IgG4	++++	++++	++++
	IgM	+	-	+++
小鼠	IgG	++	++	+++
	IgGl	+	++++	+++
	IgG2a	++++	++++	+++
	IgG2b	+++	+++	+++
	IgG3	++	+++	+++
	IgM	-	-	+++
兔	IgG	+++	+++	+
山羊	IgG	+	++	-
	IgG1	+	+++	-
	IgG2	+++	+++	-
绵羊	IgG	+	++	-
	IgGl	+	++	-
	IgG2	+++	+++	-
大鼠	IgG	+	++	+++
	IgGl	-	+	+++
	IgG2a	-	++++	+++
	IgG2b	-	++	+++
	IgG2c	++	++	+++
	IgG3	+	++	N/A
狗		++	+	N/A
猪		+++	++	+++
Kappa链抗体		-	-	+++

注：+ 表示结合能力, + 越多, 结合能力越强; -表示不结合; N/A:无数据