不一样的细胞治疗解决方案——新宠 CAT-NK, 如何给「天然杀手」装导航？

不一样的细胞治疗解决方案——新宠 CAT-NK

如何给「天然杀手」装导航？ 跟随小西一起探索吧

一 免疫系统中的“天然屏障”

NK细胞（Natural Killer Cell,NK）又称自然杀伤细胞，是机体内重要的免疫细胞，形态上属于大颗粒淋巴细胞，来源于骨髓，是除T细胞、B细胞之外的第三大类淋巴细胞，约占血液中所有免疫细胞（白细胞数量）的15%，属于天然免疫系统的核心细胞，主要分布于外周血、肝脏和脾脏。

不同于T细胞介导的免疫识别，NK细胞不需要T细胞表面受体去识别特异的肿瘤抗原，而是可以非特异性的杀死肿瘤细胞。NK细胞不仅能杀死恶性疾病的细胞，还能分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α来参与固有免疫的调节，在肿瘤免疫中扮演重要的角色。

二、 冉冉新星——CAR-NK细胞疗法

CAR-NK是通过基因工程手段修饰使其表达CAR，将识别靶细胞（如病毒感染的细胞、癌细胞）表面抗原的抗体（或受体）与激活免疫细胞所需要的信号分子连接，可以突破抑制性受体的限制而激活NK细胞，以此增强NK细胞对靶细胞的特异性杀伤。

CAR-T和CAR-NK之间有很明显的区别：NK细胞活化不需要抗原递呈细胞（APCs）的帮助，而是直接侦测癌细胞表面MHC-I分子数目，或是利用自然细胞毒性受体（NCRs）与靶细胞的配体结合而活化自身，所以效果比T细胞更为快速直接。

相较于CAR-T，CAR-NK具有很多优势：

1、CAR-NK具备更多的肿瘤杀伤途径，如执行细胞脱粒、激活凋亡途径和介导抗体依赖性细胞毒性作用(ADCC)；

2、异体CAR-NK不会引起移植物抗宿主病；

3、CAR-NK因不分泌IL-1、IL-6等炎症因子，不会诱发细胞因子风暴效应；

4、CAR-NK在体内存活周期短，不易产生长期的不良反应；

5、CAR-NK对细菌、真菌以及其他病毒等病原体也有防御作用，有助于防治并发和继发感染；

6、CAR-NK对适应性免疫具有调节作用，如通过高表达CD16等膜受体和分泌细胞因子（如IL-15），调节B细胞、NKT和CD8+T的功能。

7、CAR-NK对实体瘤治疗具有明显优势，因为实体瘤对未修饰的NK细胞会表现出不同程度的耐受性，但对抗原依赖型CAR-NK较敏感。虽然CAR-NK识别的某种（些）特异靶点丢失，但因其还表达其他活化型受体（如NCRs、NKG2C、NKG2D、DNAM-1等），所以仍可杀灭肿瘤。

总之，CAR-NK抗肿瘤活性好，安全性高，可规模化生产，为通用、即用型产品。

三、CAR-NK细胞的来源

目前，CAR-NK细胞主要来源包括外周血、脐血、诱导多能干细胞(iPSC)和NK92细胞系。经常使用的是捐赠者外周血提取的NK细胞，但不同捐赠者外周血扩增的NK细胞可能存在差异。因此，对纯化要求较高。

诱导多能干细胞(iPSC)，是指将终末分化的体细胞通过导入特定的转录因子重编程为多能干细胞。iPSC的优点较多，包括制备需少量供体细胞，可进行无限培养，成本较低，可实现自体供给，免疫原性较低。 临床数据显示，在外周血来源的NK细胞和iPSCs诱导的NK细胞上表达特异性识别肿瘤抗原的CAR基因后，CAR-NK细胞表现出比没有经过CAR基因修饰的NK细胞更强的抗肿瘤活性。

四 CAR-NK细胞治疗的临床应用与挑战

CAR-NK细胞治疗的临床应用

CAR-NK是一个很有前途的临床研究领域，对某些癌症患者具有良好的安全性和初步疗效，但仍面临一些重要挑战。一是如何选择合适的转导CAR方法是CAR-NK疗法的关键。虽然逆转录病毒载体的转染效率很高，但它可能会引起插入突变进而引发癌变和其他不良反应。尽管慢病毒载体显示出较低的插入突变发生率，但其对外周血NK细胞的转染效率低至10%。二是如何在体外扩增到更多的CAR-NK，这对NK细胞的有效激活以及杀伤作用尤为重要。综上所述，基于NK细胞优秀的抗肿瘤特性，CAR-NK有望为肿瘤治疗带来新的突破。

Seebio代理品牌WAKO NK细胞解决方案

NK细胞扩增培养

WAKO BINKIT?NK 细胞扩增套装（外周血单核细胞来源）

产品编号	产品名称	产品规格
BIJ-N501-1	BINKIT® for NK cells expansion from PBMCs BINKIT®NK细胞增殖套装（外周血单核细胞来源）	1kit
BIJ-N501-2	BINKIT® for NK cells expansion from PBMCs BINKIT®NK细胞增殖套装（外周血单核细胞来源）	2kits
BIJ-N501-4	BINKIT® for NK cells expansion from PBMCs BINKIT®NK细胞增殖套装（外周血单核细胞来源）	4kits
BIJ-N501-8	BINKIT® for NK cells expansion from PBMCs BINKIT®NK细胞增殖套装（外周血单核细胞来源）	8kits

NK细胞激活剂

产品编号	产品名称	产品规格
KRN7000	alpha-Galactosylceramide α-半乳糖神经酰胺	1mg
7DW8-5	7DW8-5(Derivative of α-Gal-Cer) 增强型NKT细胞激活剂	1mg

CD40 的刺激性单克隆抗体

间接激活自然杀伤性细胞（NK）

产品编号	产品名称	产品规格
AG-20B-0036-C100	anti-CD40(mouse),mAb(FGK45) 抗小鼠CD40单克隆抗体（FGK45）	100μg
AG-20B-0036-C500	anti-CD40?(mouse),mAb(FGK45) 抗小鼠CD40单克隆抗体（FGK45）	500μg

NK细胞抑制剂

产品编号	产品名称	产品规格
014-09801(986-10001)	Anti asialo GM1 (Rabbit) NK细胞抑制剂>	1 mL

NK细胞相关因子

产品编号	产品名称	产品规格
097-03951 093-03963	Interleukin-2 (IL-2), Human, recombinant 白介素-2（IL-2），人，重组体	50ug 1mg
032-22381	C10(CCL6), Mouse, recombinant C10(CCL6)，小鼠，重组体	10ug
095-07031 091-07033	Interleukin-15, Human, recombinant,Animal-derived-free 白细胞介素-15，人，重组，无动物源	10ug 1mg
017-24671	α1-Acid Glycoprotein, from Human Plasma α1-酸性糖蛋白，人血浆来源	10mg
099-06113	Interferon-γ, Human, recombinant,Animal-derived-free IFN-γ，人，重组体，无动物源	1mg
093-05734	Interleukin-4, Human, recombinant, Animal-derived-free 白细胞介素-4，人，重组，无动物源	1mg
090-04703	Interferon-γ, Mouse, recombinant IFN-γ，小鼠，重组体	1mg
099-05633	Interferon-γ, Human, recombinant IFN-γ，人，重组	1mg

细胞重编程试剂盒

使用cGMP质量标准制备的RNA，从皮肤、血液和尿液获得稳定的人iPS细胞。

干细胞新型基质iMatrix -511

高纯度重组人类Laminin511-E8片段，具有和全长Laminin 511具有一样的整合素蛋白结合活性，可取代全长Laminin用于ES/iPS/MSC 维持&扩增培养，同时支持向神经、视网膜、角膜分化。

产品编号	产品名称	规格
00-0076	StemRNA3rd Gen Reprogramming Kit (1 kitStemgent RNA"-NM重编程试剂盒	1kit
385-07361 381-07363	iMatrix-511 solution(0.5mg/mL) 重组层粘连蛋白511-E8片段溶液 (0.5mg/mL)	175μg×2 175μg×6

冻存产品

BAMBANKER 无血清细胞冻存液 用户文献众多

产品编号	英文名称	应用	规格
302-14681	BAMBANKER	常规工具细胞，干细胞，PBMCs,免疫细胞，类器官等	120mL
306-14684			20mL×5

PRIME-XV 无DMSO 冻存液 无动物源成分，化学成分限定，已取得美国FDA DMF

产品编号	英文名称	应用	规格
91140-10ml	PRIME-XVFreezISDMSO free	干细胞	10mL
91140-100ml			100mL

iStock 无血清细胞冻存液 无异源，已取得日本《再生医疗等制品材料适格性确认书》

产品编号	英文名称	应用	规格
385-19451	iStockXeno-Free Freezing medium	人免疫细胞，PBMCs,MSCs,iPS等	120mL

五 其它细胞治疗相关产品

CAR-T细胞

MSC干细胞

CiMS 人间充质干细胞用无血清培养基

产品编号	产品名称	规格
87-070	CiMS-BM 人间充质干细胞用基础培养基	500mL
87-071	CiMS-sXF 人间充质干细胞用基础培养基添加剂（Xeno-Free）	10mL
87-072	CiMS-sAF人间充质干细胞用基础培养基添加剂（Animal-Free）	10mL

干细胞解离

产品编号	产品名称	规格
386-02271	DISPASE® I 分散酶®	1g（10,000PU x6Vial培养用）
383-02281	DISPASE® II 分散酶®Ⅱ	1g（10,000PU x6Vial培养用
160-27051	hPSC Dissociation Solution	100ml

干细胞用小分子化合物

已取得日本DMF

产品编号	英文名称	应用	规格
259-00613	Y-27632,MF	强效ROCK抑制剂，用于无饲养层人iPS/ES细胞的培养，冻存，复苏等。	5mg
257-00614			25 mg
010-26741	A-83-01,MF	ALK4,ALK5,ALK7的选择性抑制剂，可用于大鼠iPS细胞等未分化培养。	5mg
018-26742			25 mg
068-06663	bFGF Solution,MF	人ES/iPS细胞维持和培养必须的因子，可诱导向心肌细胞等的分化。	50μL×4
062-06661			50μL
032-25441	CHIR99021,MF	GSK-3β高选择性抑制剂，可高效抑制和调节ES细胞的分化。	5mg
038-25443			25mg

细胞治疗相关因子

产品编号	产品名称	规格
093-05631	Interferon-γ, Human, recombinant γ-干扰素，人，重组体（IFN-γ）	100μg
133-13231	MDC, Human, recombinant MDC，人，重组体（MDC/CCL22）	20μg
135-16731	MDC, Mouse, recombinant MDC,小鼠，重组体（MDC/CCL22）	20μg
067-05751	Fractalkine, Human, recombinant 分形趋化因子，人，重组体（Fractalkine/CX3CL1）	20μg
138-13041	MIP-1α, Human, recombinant MIP-1α，人，重组体（MIP-1α/CCL3）	20μg
131-16711	MCP-2, Mouse, recombinant MCP-2，小鼠，重组体（MCP-2/CCL8）	20μg
138-16721	MCP-4, Human, recombinant MCP-4，人，重组体（MCP-4/CCL13）	20μg
098-03964 090-03963	Interleukin-4, Human, recombinant 白细胞介素-4，人，重组体（IL-4）	20μg 1mg
096-05361	Interleukin-12, Human, recombinant 白细胞介素-12，人，重组体（IL-12）	10μg
133-13611 139-13613 137-13614	Macrophage Colony-Stimulating Factor, Human,  recombinant 巨噬细胞集落-刺激因子，人，重组体（M-CSF）	10ug 50ug 1mg

总结：异体的NK细胞的扩增培养和基因修饰会提高NK细胞的肿瘤杀伤能力。CAR-NK细胞治疗将会在未来的抗肿瘤治疗策略中扮演至关重要的角色。Seebio 生物将助力细胞治疗解决工艺上的挑战，加速临床转化并最终服务于更多的病人。我们将持续为大家分享新的细胞治疗工艺创新解决方案。敬请期待。

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