西宝生物KroVin300防腐剂抑菌实验和效果 - 细菌篇

一、实验原理    

利用抑菌剂不断溶解经琼脂扩散形成不同浓度梯度，已显示其抑菌作用。实验通过抑菌圈大小判断其是否具有抑菌能力。

二、实验器材    

100mm培养皿、离心管、移液器、超净台、计数板、生理盐水、生化培养箱、无菌蒸馏水、接种环、大豆酪蛋白琼脂培养基等。

菌种：    

自然菌液: 吸取西宝生物实验室水槽，卫生间下水池，一楼下水管，以及大门口的养鱼池的水，一共大约20ml, 进行自然沉降，取上清液部分。

防腐剂：    

1.Seebio KroVin300防腐剂（共四个批次，用P1、P2、P3、P4标识）
2.某进口品牌的P**300

三、实验步骤    

1、实验工具准备及灭菌    

2、培养基制备    

称取10.5g培养基干粉，加入300ml纯化水，搅拌加热煮沸至完全溶解。再加入6g的葡萄糖，搅拌溶解。向各培养皿内注入约20ml的熔化状琼脂培养基(约45℃)，待其冷却，备用。

3、防腐剂配制    

用蒸馏水对不同类防腐剂分别按照1:250、1:500、1:1000、1：2000配制 ，做好标记。

4、菌悬液制备    

取适量菌种加入生理盐水1ml,稀释10倍，采用平板计数法，稀释，得到10^6CFU/ml浓度菌悬液。

5、试验菌接种    

10^6CFU/ml试验菌悬液0.2ml,将其接种到已经倒好培养基的培养皿内，用涂布棒涂布均匀（每次使用涂布棒前酒精灯下灭菌），盖好培养皿。

6、添加防腐剂    

6.1 纸片法

用镊子将圆片约5.5mm滤纸平均放置在培养皿上，每个培养皿放置4个圆滤纸（4个防腐剂浓度用）。吸取不同种类，不同浓度的防腐剂3ul，加入到圆滤纸中，让防腐剂溶液分布满整个滤纸，但又不溢出，盖好培养皿。

6.2 打孔法

在培养皿里培养基上打4个孔，用100ul枪头打孔。各孔中心之间相距25mm左右，与培养皿边缘相距15mm以上。每个培养皿为一种防腐剂的4个浓度。用微量移液器吸取防腐剂6ul到孔内，让防腐剂刚好齐培养基面，盖好培养皿。

7、培养并观察抑菌效果    

于37℃生化培养箱中正置培养，培养16-18小时观察结果。测量抑菌圈并记录。

四、实验结果    

1、纸片法实验数据和图片

16h	防腐剂1	防腐剂2	防腐剂3	防腐剂4	P**300
1/250	2.2	2.0	1.9	2.1	1.4
1/500	1.7	1.7	1.5	1.7	1.1
1/1000	1.5	1.5	1.2	1.4	0.6
1/2000	0.6	0.8	0.9	1.2	0.5

   

2、打孔法实验数据和图片

打孔法（1/10）

16h	防腐剂1	防腐剂2	防腐剂3	防腐剂4	P**300
1/250	2.2	2.2	2.0	2.2	1.5
1/500	1.9	1.8	1.6	1.9	1.1
1/1000	1.5	1.5	1.4	1.5	0.9
1/2000	1.1	1.0	1.0	1.2	0.6

   

打孔法（1/2）

16h	防腐剂1	防腐剂2	防腐剂3	防腐剂4	P**300
1/250	2.2	2.0	1.9	2.1	1.5
1/500	1.8	1.7	1.6	1.7	1.2
1/1000	1.5	1.4	1.3	1.5	0.9
1/2000	1.1	1.0	1.1	1.1	0.5

   

结论    

从两次实验结果来看，防腐剂P1-P4的抑菌效果都是优于对照P**300的抑菌效果。

从抑菌浓度来看，防腐剂P1-P4的1/1000的效果跟对照P**300的1/250的效果相当。

总结    

总体来看，西宝的公司KV300之P1-P4批次的抑菌效果明显优于P**300，1：1000～1：2000高稀释倍数的抑菌效果差距明显。故建议具体使用浓度视溶液营养份而定，但不宜稀释过低。实验显示西宝KroVin300在细菌、霉菌、酵母菌的杀菌抑菌效果上明显优于某进口品牌的P**300。

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KroVin系列防腐剂产品列表

物料编码	产品名称	包装规格
ACN0054A	KroVin 100	100ml,500ml,1L
ACN0037B	KroVin 300	25ml,100ml,500ml,1L,5L
ACN0046A	KroVin 500	25ml,100ml,500ml,1L
ACN0043B	KroVin 950	25ml,100ml,500ml,1L,5L
ACN0911A	KroVin 1100	25ml,500ml,5L

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