全能核酸酶应用一瞥

在生物制品的制备/生产过程中，去除DNA残留是极为重要的。常用的去除DNA的方法如沉淀法在DNA残留要求较高的时候难以达到，因为会发生聚集和包裹现象，影响去除效果。而酶解法在使用时需摸索最佳条件，操作繁琐，重复性差。直至全能核酸酶的出现，才能高效、可重复性地去除DNA，保证了生物制品的高品质和高产量。

 

DENARASE®全能核酸酶是一款来自粘质沙雷菌的基因工程内切酶，是生物制品生产工艺中常用全能核酸酶的典型代表。DENARASE®全能核酸酶能够降解所有形式的DNA和RNA(包括单链、双链、线性、超螺旋和环状DNA、RNA及基因组DNA)，形成较小的寡核苷酸（主要由2-5个碱基对组成）对核酸序列没有特异性，且没有蛋白酶活性。

产品以液体形式提供，制剂组成：20mM Tris盐酸盐缓冲液pH8.2，20mM氯化钠，2mM氯化镁，50%甘油(v/v)。

分子量：27 kDa (具有两个相同亚基的单体)
最适pH：pH 8.0~9.0
最适温度：37℃
等电点：pH 6.2
辅因子：Mg2+

 

• 用于疫苗的病毒或病毒样颗粒纯化：核酸酶通过去除病毒类产品外源性核酸，降低核酸残留毒性风险，提高产品安全性；
• 改善重组蛋白工艺：进行重组蛋白纯化或者天然蛋白提取研究中，第一步就需要用裂解液对其进行裂解释放蛋白，此时往往伴随着大量的基因组DNA被释放出来，很多并不是独立存在的，往往与核蛋白以复合物的形式存在，导致提取物非常粘稠，呈鼻涕状。蛋白提取过程中若不能很好处理这些粘稠基因组，会造成蛋白提取效率的降低和丢失。
  若在加裂解液的同时加入一定量的DENARASE®全能核酸酶，可以很好的清除粗提物中的核酸，有效降低粘度，提高后续操作的效率。工程细胞裂解后加入核酸酶可降低料液的黏度，缩短处理时间，提高蛋白产量；
• 颗粒(病毒、包涵体等)预处理：核酸很容易粘附在病毒样颗粒（VLP）、病毒粒子、包涵体等细胞生成颗粒的表面，使颗粒大小或电荷发生改变，造成这些颗粒的聚集。全能核酸酶可有效降解核酸，避免核酸对细胞产物的影响，利于提高细胞产物纯化效率；
• 电泳和色谱样品的制备：用于ELISA、柱层析、二维电泳和印迹分析的样品制备，经核酸酶处理后可提高分辨率和回收率。

 

条件参数	最适条件	可作用条件
Mg2+	1-2 mM	1-10 mM
pH	8.0-9.2	6.0-10.0
Temp	37℃	0-42℃
DTT	0-100 mM	>100 mM
β-Mercaptoethanol	0-100 mM	>100 mM
Monovalent cation（Na+，K+）	0-20 mM	0-150 mM
PO43-	0-10 mM	0-100 mM

 

• 采用革兰氏阳性的芽孢杆菌生产，降低了内毒素污染风险；
• 完全采用非动物性原料，不添加抗生素，符合GMP生产标准；
• 降解所有形式的DNA和RNA；
• 无蛋白酶、内毒素污染；
• 广泛的试剂兼容性；
• 超高的核酸消化活力；
• 每批次产品严格质保与功能验证。