链霉亲和素的应用与实验举例

1 概述：

链霉亲和素 (Streptavidin，简称SA)，是链霉菌在培养过程中分泌的一种蛋白质产物。具有与生物素特异结合的能力，结合常数高达1015M。同时，由于链霉亲和素等电点比亲和素低，且不含糖基链，故在检测中的灵敏度和特异性都高于亲和素，建立在此基础上的生物素-链霉亲和素系统的应用比生物素-亲和素系统有更大优势。

链霉亲和素是四聚体蛋白，大小为66KDa。一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合，两者之间的亲和力极为强烈，链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于10 mol/L数量级，这一性质常用于分子生物学用途。其中一条完整的SA肽链中有159个氨基酸残基，分子量为16450。

2 应用领域：

链霉亲和素具有与生物素特异结合的能力，并能与HRP、AP、磁珠等结合，且等电点比亲和素低，不含糖链，因而参与免疫学中的检测信号放大，广泛应用于ELISA、IHC、WB等实验及亲和色谱填料的制备、生物传感器、生物芯片的制作。

3 实验举例&操作步骤：

一、在ELISA实验中用于包被和信号放大

1、用碳酸钠缓冲溶液（pH 9.6）溶解冻干粉，将浓度稀释成3-10ug/ml （客户可设定梯度进行实验）

2、用移液器吸取100ul/孔，4℃过夜包被或者37℃包被2h；

3、洗涤：倒尽板孔中液体，加200ul洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽，扣干

4、后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程

二、SA偶联磁珠用于化学发光反应

2.1 NHS 活化

1、充分混匀磁珠后，取100μl 羧基磁珠到1.5 ml 离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液；

2、取200μl MES溶液（25mM，pH 5.0）加入到离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液。重复该步骤1 次；

3、迅速加入新配制的50μlEDC溶液和50μl NHS 溶液（均为50mg/ml，以上述MES配制）到装有磁珠的离心管中，漩涡混匀使磁珠充分悬浮，室温下垂直混合30min；

4、反应结束后，加入100μl 上述 MES 溶液洗涤 2 次；（活化状态不宜长时间保存，建议立即进行偶联）

2.2 蛋白偶联

1、将离心管置于磁性上，分离去除上清液，加入100μl蛋白溶液（25 mM MES，pH 5.0） 轻柔地混匀；（蛋白浓度在0.1-2.0mg/ml）

2、在室温下垂直混合反应2h，或在4℃条件下垂直混合过夜；

3、反应结束后将离心管置于磁分离架上，磁性分离去除上清液，加入1ml 2-Aminoethanol;溶液（3M，pH9.0）洗涤磁珠 2 次；

4、加1ml 2-Aminoethanol溶液（3M, pH 9.0）于离心管中，涡旋30s，将离心管置于垂直混合仪中室温反应1-2h；

5、反应结束后，将离心管置于磁力架上，待固液分离后移除上清液，然后加入100μl纯化水轻柔涡旋 30s，磁吸分离，重复该步骤 1 次；

6、加入适量的保存液保存于4°，如果固定的生物配体稳定，可以在保存溶液中加入0.02%（W/V）Sodium azide作为抑菌剂。

 

4 产品列表：

【名称】链霉亲和素 (streptavidin，SA)
【分子量】60 kDa
【来源】大肠杆菌重组表达
【保存条件】-20℃保存

质量指标

Purity(SDS-PAGE)	≥95%
Purity(HPLC)	≥95%
Solubility	Colorless transparent liquid
pH	6.6~7.4
Identification	Positive
Appearance	White lyophilized powder, no visual foreign matters