如何使用抗-PEG琼脂糖亲和纯化mPEG-BSA

使用9B5抗-聚乙二醇琼脂糖亲和纯化20kDa的mPEG-BSA

 

产品描述：

9B5抗-聚乙二醇琼脂糖(货号9B5-AG) 是由单克隆抗体9B5-625-7在FC区与琼脂糖发生不可逆偶联制备得到。每毫升固定琼脂糖大约偶联0.6 毫克抗体。

 

方法： 
1. 9B5 抗-聚乙二醇琼脂糖 (3 ml) 和 150 mM 氯化钠, 10 mM 磷酸钠, 0.1% 叠氮钠 pH 7.2 (磷酸缓冲溶液PBS) 在内径1 cm的柱子内混合均匀直至平衡。

2. 1.0 毫升含有0.125毫克90% 纯的20 kDa甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白和0.5毫克人肌红蛋白混合物在磷酸缓冲溶液PBS 中加入柱子中。

3. 柱子用每次2毫升PBS冲洗，共4次。

4. 用每次1毫升含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的50%磷酸缓冲液洗脱，共9次。

5. 组分使用PAM凝胶电泳测定在12.5% Laemmli 迷你凝胶上跑胶分析。

 

结果：如下图所示, 20 kDa甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白结合 9B5抗-聚乙二醇琼脂糖, 对照过柱的未结合聚乙二醇的蛋白质，包括牛血清白蛋白和人肌红蛋白。 纯20 kDa 甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白使用含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的缓冲溶液进行洗脱.

 图1. 考马斯蓝染色SDS-PAGE凝胶电泳显示1道为柱载，经9B5抗-聚乙二醇亲和纯化过的20kda的使用含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的缓冲溶液进行洗脱。2-6道，为过流部分和洗涤部分。7-9道，为洗脱部分。

 

注意：

1. 在与抗-聚乙二醇琼脂糖进行结合前，应确保样品不含未结合聚乙二醇。

2. 聚乙二醇集合蛋白质可以使用25%乙二醇而无需聚乙二醇8000进行洗脱，但需要用到更多的缓冲溶液。乙二醇随后很容易通过透析除去。

3. 使用含25%乙二醇的磷酸缓冲液（约20倍柱体积）冲洗，然后在PBS中再次平衡，很容易再生9B5抗-聚乙二醇琼脂糖。