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多糖糖基化和糖链分析常规问题

发布时间：2015-01-08 10:48 | 点击次数：575

FAQs

Q: 如何从糖蛋白中释放N-多糖糖链?

A: 目前普遍采用2种技术用于释放糖蛋白N-多糖糖链用于糖基化分析 - 肼解和内切糖苷酶处理。《糖基化分析指南》涵盖了一些在选择这些释放方法时的注意事项。

Q: 如何制止唾液酸从糖链上掉落?

A: 唾液酸是棘手的事情。根据我们的经验，多糖样品纯度越高，唾液酸残余就越容易掉落。虽然有些灵敏的预防措施，比如：

避免pH酸性和升温。尽可能保持pH在6-9范围，温度低于30°C。
在使用离心或旋转蒸发干燥糖链样品时应小心操作，保持温度低于25°C。冷冻干燥(冻干)对于防止唾液酸降解更为有效，但存在更大的风险是，在真空放空时，可能导致样品全部损失。

Q: 对于多糖糖链分析而言，最佳的荧光标记是什么?

A: 下表展示了在使用HPLC, CE 和MS进行糖基化分析时,最常用的荧光标记:

多糖荧光标记	主要应用	荧光波长和常规分析方法
2-AB (2-氨基苯甲酰胺)	使用HPLC/MS分析寡糖	Λex = 320 - 360 nm, Λem = 420 nm HPLC (amide, C18, AEX, HPAE-FD, PGC), ES-MS, MALDI-MS
2-AA (2-氨基苯甲酸)	使用HPLC/MS分析寡糖使用HPLC分析单糖	Λex = 320 - 360 nm, Λem = 420 nm Oligosaccharides: HPLC (amide, C18, AEX, PGC), ES-MS, MALDI-MS Monosaccharides: HPLC (C18)
APTS (8-氨基芘-1,3,6-三磺酸)	使用CE分析寡糖	Λex = 455 - 488 nm, Λem = 510 - 520 nm CE
AA-Ac (3-(乙酰氨基)-6-氨基吖啶)	使用HPLC分析寡糖	Λex = 382, 445 nm, Λem = 525 nm HPLC (amide, C18, AEX), ES-MS, MALDI-MS
DMB (1,2-二氨基-4,5-亚甲二氧基苯)	使用HPLC分析人以及非人类唾液酸	Λex = 373 nm, Λem = 448 nm HPLC (C18)

关键词: AEX = 阴离子交换, HPAE-FD = 强碱性阴离子交换带荧光检测, PGC = 多孔石墨烯, HPLD = 高效液相色谱, MS = 质谱 , MALDI = 基质辅助激光解吸附质谱, ES = 电喷雾质谱, CE = 阳离子交换高效液相色谱

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