一步法RT-PCR反转录试剂盒

发布时间：2014-01-16 09:41 | 点击次数：1852

一步法RT-PCR试剂盒可将反转录和PCR扩增同时进行，该系列在一个优化的缓冲液体系中同时加入 MMLV反转录酶和热启动Taq DNA聚合酶，可以扩增RNA的片段长度高达4.0 kb。总RNA的用量为0.01 pg到2 ug之间，该试剂盒为50 μl的反应体系。

试剂盒组分

产品
Reaction	20	50	100
Enzyme mix: MMLV RT/ Hot start Taq Mix	20 μL	50 μL	100 μL
2× Reaction mix (optimized bμffer contains dNTP and Mg2+)	500 μL	1.25 mL	2×1.25 mL
5 mM Magnesiμm Sμlfate	500 μL	1.0 mL	2×1.0 mL
dd H2O	600 μL	1.5 mL	2×1.5 mL

产品特点：

1、方便快捷：反转录和PCR扩增一管进行
2、最优化的反转录和高效扩增体系
3、高度的灵敏性、特异性及重现性

推荐RT-PCR反应体系

建议用如下组成配制RT-PCR反应起始液：

* 如有必要，镁盐浓度可进一步优化。

1．将反应溶液在冰上解冻。

2．按下列热循环程序进行反应，以便cDNA合成之后立刻进行PCR扩增。

cDNA合成: 1 cycle: 40–50°C for 10 min
变性: 1 cycle:94°C for 2 min
PCR 扩增: 40 cycles:
94°C for 15 s
55-65°C for 30 s
68°C for 1 min/kb

3．用凝胶电泳检测RT-PCR扩增产物。

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